4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.5. Quy trình nhân giống invitro loài lan Hoàng thảo Dendrobium chrysanthum Lindl.
ở giai đoạn vườn ươm thì giá thể tốt nhất là bột xơ dừa + xơ dừa theo tỷ lệ1:1 và phun dinh dưỡng qua lá Komix là tối ưu nhất cho sinh trưởng của câỵ
4.5. Quy trình nhân giống in vitro loài lan Hoàng thảo Dendrobium chrysanthum Lindl. chrysanthum Lindl.
Bước 1: Chọn nguồn vật liệu ban đầu
- Cây mẹ là cây có giả hành to mập (đường kính 1,5cm đến 1,8cm), chiều dài 70cm đến 90cm, lá lớn (chiều dài lá khoảng 9cm, chiều rộng lá khoảng 3cm). Cây có sinh trưởng tốt, không bị sâu bệnh.
- Tiến hành nuôi dưỡng, chăm sóc đến mùa cây ra hoa, vào T8 - T9 hàng năm. - Thụ phấn tạo quả vào T8 đến T9, để thu quả vào T1 đến T2 năm saụ
Bước 2: Khử trùng, khởi động mẫu:
- Chọn quả sau thụ phấn khoảng 4 – 5 tháng, quả mềm, không bị nứt vỡ, thu hái quả ở đúng độ chín, sau đó tiến hành khử trùng để đưa vào làm nguồn nguyên liệu trong nuôi cấy mô.
Tại phòng chuẩn bị:
+ Quả lan sau khi thu hái được cắt tỉa chỉ để lại nguyên phần mang quả có chiều dài khoảng 3,5cm đến 4,5cm.
+ Tiến hành rửa quả dưới vòi nước chảỵ
+ Sau đó ngâm lắc quả trong 10 phút, rửa sạch quả trong dung dịch xà phòng, rửa sạch quả dưới vòi nước chảỵ
+ Để quả vào bình sạch.
Trong phòng cấy mẫu, tại bốc cấy (Laminer):
+ Tráng sạch quả bằng nước cất vô trùng khoảng 3 lần.
+ Nhúng quả trong dung dịch cồn 960, hơ đốt trên ngọn lửa đèn cồn trong 1 phút.
+ Rạch quả, lấy hạt cấy rải đều trên bề mặt môi trường nuôi cấy khởi động. (Môi trường nuôi cấy khởi động cho gieo hạt là : Nền MS + (100ml nước dừa + 10g saccarose + 6g agar)/1lít môi trường).
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 62 + Lượng hạt trong 01 quả lan sẽ cấy được cho 10 bình tam giác loại 250ml, 70ml môi trường nuôi cấy khởi động/ 01 bình tam giác.
Trong phòng nuôi cấy:
+ Các bình mẫu cấy được chuyển vào phòng nuôi, sau 60 ngày sẽ thu được các cụm chồi/bình.
+ Tất cả các bình mẫu được nuôi trong các điều kiện: Nhiệt độ 260C - 280C.
Ánh sáng 2000 lux.
Quang chu kỳ: 16h sáng + 8h tốị
Bước 3: Nhân nhanh cụm chồi
Trong phòng cấy mẫu, tại bốc cấy (Laminer):
- Chọn tách riêng các chồi, cụm chồi đủ tiêu chuẩn, cấy vào môi trường nhân nhanh cụm chồị
- Môi trường nhân nhanh cụm chồi: Môi trường MS + (100ml nước dừa + 10g saccarose + 60g chuối chín + 6g agar)/1lít môi trường.
Trong phòng nuôi cấy:
Tất cả các bình mẫu được nuôi trong các điều kiện: Nhiệt độ 260C - 280C.
Ánh sáng 2000 lux.
Quang chu kỳ: 16h sáng + 8 h tối
Bước 4: Tạo cây hoàn chỉnh, để chuẩn bị chuyển cây ra ngoài vườn ươm
Trong phòng cấy mẫu, tại bốc cấy (Laminer)
- Chọn tách riêng những chồi có tiêu chuẩn, chiều cao đạt 3,5cm, 3 lá cấy vào môi trường tạo cây hoàn chỉnh. Loại bình cấy thích hợp sử dụng trong nuôi cấy in vitro là bình trụ thủy tinh. Nút đậy bình là nút nhựạ
- Môi trường tạo cây hoàn chỉnh: Nền RE + (10g saccarose + 1,0g THT + 6g agar)/1lít môi trường.
Trong phòng nuôi cấy:
Tất cả các bình mẫu được nuôi trong các điều kiện: Nhiệt độ 260C - 280C.
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 63 Ánh sáng 1300 lux.
Quang chu kỳ: 16h sáng + 8 h tối
Sau 1 tháng sẽ tạo cây hoàn chỉnh có chiều cao 5cm, 4 lá, 4 rễ, đủ tiêu chuẩn để tiến hành đưa ra vườn ươm.
Bước 5: Đưa cây xuống vườn ươm
- Vườn ươm có mái che, có thể điều chỉnh được phần nào cường độ chiếu sáng, ẩm độ không khí.
- Giá thể trồng cây là bột xơ dừa với xơ dừa theo tỷ lệ 1:1.
- Có thể sử dụng chế phẩm dinh dưỡng Komic trong quá trình trồng cây ở vườn ươm.
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 64
Cây mẹDendrobium chrysanthum Lindl.
được chọn lọc
Vào mẫu
(Quả lan 5 tháng, khủ trùng bằng hơ đốt ngọn lửa côn)
Vườn ươm
(Giá thể Xơ dừa + bột xơ dừa (1:1), thời điểm ra cây thích hợp là vụ Xuân, tỷ lệ sống
đạt 100%
Nuôi cấy khởi động mẫu
Khoáng MS + 100ml nước dừa + 10g saccharoza + 6,0g agar/lít môi trường
Nhân nhanh chồi
MS(1962) + 100ml ND + 10g sacroza + 60g chuối + 6,0g agar/lít môi trường
Tái sinh tạo cây hoàn chỉnh Và nuôi dưỡng
Cây giống đạt chiều cao 5 cm, 4 lá, 4 rễ
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 65