3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.2.Phương pháp nghiên cứu
3.2.2.1. Nội dung 1:
Thí nghiệm 1. Ảnh hưởng chế độ khử trùng chồi đến tỷ lệ mẫu sống trên cây lan Dendrobium chrysanthum Lindl.
Công thức Khử trùng lần 1 Khử trùng lần 2
Công thức 1 (CT1) H2O2 2%, 5phút H2O2 2%, 2 phút
Công thức 2 (CT2) H2O2 2%,5 phút HgCl2 0,1%, 2 phút
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 39 Tiến hành:
+ CT1: Tráng sạch mẫu chồi bằng nước cất vô trùng rồi ngâm trong dung dịch cồn 700 trong 1 phút; tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch H2O2 2% trong 5 phút, tráng sạch nhiều lần bằng nước cất vô trùng; tách bỏ bớt phần lá bao bên ngoài, ngâm trong dung dịch H2O2 2% trong 2 phút, tráng sạch nhiều lần bằng nước cất vô trùng. Cấy mẫu vào trong môi trường nuôi mẫụ
+ CT2: Tráng sạch mẫu chồi bằng nước cất vô trùng rồi ngâm trong dung dịch cồn 700 trong 1 phút; tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch H2O2 2% trong 5 phút, tráng sạch nhiều lần bằng nước cất vô trùng; tách bỏ bớt phần lá bao bên ngoài, ngâm trong dung dịch HgCl2 0,1% trong 2 phút, tráng sạch nhiều lần bằng nước cất vô trùng. Cấy mẫu vào trong môi trường nuôi mẫụ
+ CT3: Tráng sạch mẫu chồi bằng nước cất vô trùng rồi ngâm trong dung dịch cồn 700 trong 1 phút; tráng sạch lại bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch HgCl2 0,1% trong 3 phút, tráng sạch lại bằng nước cất vô trùng; tách bỏ bớt phần lá bao bên ngoài, ngâm trong dung dịch HgCl2 0,1% trong 1 phút, tráng sạch lại bằng nước cất vô trùng. Cấy mẫu vào trong môi trường nuôi mẫụ
Môi trường nuôi mẫu chồi mầm: (MS + 100ml CW +10g saccarose + 6g agar)/lít MT.
Thí nghiệm được tiến hành với 3 công thức, bố trí 3 lần nhắc, mỗi lần nhắc 30 mẫu/công thức.
Thí nghiệm 2. Ảnh hưởng chế độ khử trùng quả đến tỷ lệ mẫu sống và hình thái mẫu phát sinh của loài lan Dendrobium chrysanthum Lindl.
CT Cách khử trùng
CT1 Đốt bằng cồn 960
CT2 H2O2 2%, 5 phút
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 40 Tiến hành:
+ CT1: Tráng sạch mẫu quả bằng nước cất vô trùng, nhúng quả trong dung dịch cồn 960, dùng panh gắp quả hơ trên ngọn lửa đèn cồn trong 1 phút. Cắt, rạch quả và gieo hạt trên môi trường nuôi cấỵ
+ CT2: Tráng sạch mẫu quả bằng nước cất vô trùng, ngâm rửa trong dung dịch cồn 960, tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch H2O2 2% trong 5 phút, tráng sạch nhiều lần bằng nước cất vô trùng. Cắt, rạch quả và gieo hạt trên môi trường nuôi cấỵ
+ CT3: Tráng sạch mẫu quả bằng nước cất vô trùng, ngâm rửa quả trong dung dịch cồn 960, tráng sạch bằng nước cất vô trùng, ngâm trong dung dịch HgCl2 0,1% trong 2 phút, tráng sạch quả nhiều lần bằng nước cất vô trùng. Cắt, rạch quả và gieo hạt trên môi trường nuôi cấỵ
Môi trường gieo hạt: (MS + 100ml CW +10g saccarose + 6g agar)/lít.
Thí nghiệm được tiến hành trên mẫu quả với 3 công thức, bố trí 3 lần nhắc, mỗi lần nhắc 3 quả/công thức.
3.2.2.2. Nội dung 2
Thí nghiệm 3. Ảnh hưởng nền môi trường nuôi cấy đến khả năng nhân nhanh cụm chồilan Dendrobium chrysanthum Lindl.
Thí nghiệm tiến hành trên 4 công thức, mỗi công thức cấy 3 bình, mỗi bình cấy 3 cụm chồi, mỗi cụm chồi có đường kính 10mm và chứa 15 chồi, thí nghiệm 3 lần nhắc.
Các công thức thí nghiệm: CT1: VW
CT2: KC CT3: MS CT4: RE
Cả 4 công thức đều được bổ sung (100ml CW + 10g saccarose + 6g agar)/lít
Thí nghiệm 4. Ảnh hưởng hàm lượng đường saccarose đến khả năng nhân nhanh cụm chồi lan Dendrobium chrysanthum Lindl.
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 41 Thí nghiệm tiến hành trên 5 công thức, mỗi công thức cấy 3 bình, 3 cụm chồi/bình, 15 chồi/cụm, thí nghiệm 3 lần nhắc.
Các công thức thí nghiệm: CT1: ĐC + 0 g saccarose/lít CT2: ĐC + 10g/lít CT3: ĐC + 20g/lít CT4: ĐC + 30g/lít CT5: ĐC + 40g/lít
Ghi chú: ĐC = Công thức tốt nhất của thí nghiệm 3, không bổ sung saccarose (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thí nghiệm 5. Ảnh hưởng dịch chiết hữu cơ tự nhiên bổ sung vào môi trường nuôi cấy đến khả năng nhân nhanh cụm chồi lan Dendrobium chrysanthum Lindl.
Thí nghiệm tiến hành trên 11 công thức, mỗi công thức cấy 3 bình, 3 cụm chồi/bình, mỗi cụm chồi có đường kính 10mm và chứa 15 chồi, thí nghiệm 3 lần nhắc. Các công thức thí nghiệm: CT1: ĐC CT2: ĐC + (60g khoai tây)/lít CT3: ĐC + (60g cà rốt)/lít CT4: ĐC + (60g táo)/lít CT5: ĐC + (60g chuối chín)/lít CT6: ĐC + (60g khoai tây + 60g cà rốt)/lít CT7: ĐC + (60g khoai tây + 60g táo)/lít CT8: ĐC + (60g khoai tây + 60g chuối)/lít CT9: ĐC + (60g cà rốt + 60g táo)/lít CT10: ĐC + (60g cà rốt + 60g chuối)/lít CT11: ĐC + (60g táo + 60g chuối)/lít
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 42
Thí nghiệm 6. Ảnh hưởng hàm lượng chuối chín đến khả năng nhân nhanh cụm chồi lan Dendrobium chrysanthum Lindl.
Thí nghiệm tiến hành trên 7 công thức, mỗi công thức cấy 3 bình, 3 cụm chồi/bình, mỗi cụm chồi có đường kính 10mm, 15 chồi/cụm, thí nghiệm 3 lần nhắc.
Các công thức thí nghiệm: CT1: ĐC + 0g chuối/lít CT2: ĐC + 30g chuối/lít CT3: ĐC + 60g chuối/lít CT4: ĐC + 90g chuối/lít CT5: ĐC + 120g chuối/lít CT6: ĐC + 150g chuối/lít CT7: ĐC + 180g chuối/lít
Ghi chú: ĐC = Công thức tốt nhất của thí nghiệm 5
3.2.2.3. Nội dung 3
Thí nghiệm 7. Ảnh hưởng nền môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng của chồi lan Dendrobium chrysanthum Lindl.
Thí nghiệm tiến hành trên 4 công thức, mỗi công thức cấy 3 bình, 5 chồi/bình, mỗi chồi có chiều cao 3 cm, 3 lá, thí nghiệm 3 lần nhắc.
Các công thức thí nghiệm: CT1: VW
CT2: KC CT3: MS CT4: RE
Mỗi công thức thí nghiệm đều được bổ sung (10g saccarose + 6g agar)/lít.
Thí nghiệm 8. Ảnh hưởng than hoạt tính đến khả năng ra rễ của chồi lan
Dendrobium chrysanthum Lindl.
Thí nghiệm tiến hành trên 5 công thức, mỗi công thức cấy 3 bình, 3 chồi/bình, mỗi chồi có chiều cao 3 cm, 3 lá, thí nghiệm 3 lần nhắc.
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 43 CT1: ĐC + 0g THT CT2: ĐC + 0,5g THT/lít CT3: ĐC + 1,0g THT/lít CT4: ĐC + 1,5g THT/lít CT5: ĐC + 2,0g THT/lít
Ghi chú: ĐC = Công thức tốt nhất của thí nghiệm 7
Thí nghiệm 9. Ảnh hưởng cường độ chiếu sáng tới sinh trưởng của chồi lan
Dendrobium chrysanthum Lindl.
Thí nghiệm tiến hành trên 4 công thức, mỗi công thức cấy 3 bình, 5 chồi/bình, mỗi chồi có chiều cao 3cm, 3 lá, thí nghiệm 3 lần nhắc.
Các công thức thí nghiệm: CT1 (ĐC): 800 lux
CT2 : 1.300 lux CT3 : 1800 lux CT4 : 2300 lux
Ghi chú : Các công thức được tiến hành trên nền môi trường tốt nhất của thí nghiệm 8.
3.2.2.4. Nội dung 4:
Thí nghiệm 10. Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống và chất lượng cây con ngoài vườn ươm loài lan Dendrobium chrysanthumLindl.
Thí nghiệm tiến hành trên 3 công thức; mỗi công thức trồng trong 3 rổ, 30 cây/rổ, mỗi cây có chiều cao 5cm, 5 lá, 4 rễ, cây cách cây 3cm, hàng cách hàng 4 cm. Các cây được tưới giữ ẩm hàng ngàỵ
Các công thức thí nghiệm: CT1: Xơ dừa + Bột xơ dừa CT2: Xơ dừa
CT3: Than củi
Trường Đại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp……….. 44 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thí nghiệm 11. Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua lá đến chiều cao cây và số lá trên cây lan Dendrobium chrysanthum Lindl. ngoài vườn ươm.
Thí nghiệm tiến hành trên 5 công thức; mỗi công thức trồng trong 3 rổ, 30 cây/rổ, mỗi cây có chiều cao 5cm, 5 lá, 4 rễ, cây cách cây 3cm, hàng cách hàng 4 cm. Các cây được tưới giữ ẩm hàng ngàỵ
Các công thức thí nghiệm: CT1: Phun nước lã CT2: Antonic 0,2ml/lít CT3: Yogen 1g/ lít CT4: Komix 2ml/lít CT5: Growmore 1g/ lít
Ghi chú: Tiến hành phun chế phẩm dinh dưỡng sau khi trồng cây ra ngoài vườn ươm 1 tháng.