2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.2. Phương pháp nghiên cứu
Thực hiện các thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng đơn sắc và các tỉ lệ ánh sáng đơn sắc đến sự tái sinh chồi bất định, rễ bất định, hình thành PLB và cây con từ mô lá, phôi và PLB in vitro. Khảo sát hình thái giải phẫu và sinh trắc
nghiệm…
Bố trí thí nghiệm:
Các nghiệm thức được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi bình cấy 3 hoặc 5 mẫu trong bình thủy tinh 100 ml hoặc 250 ml tùy vào từng đối tượng. Mỗi nghiệm thức được lặp lại 3 đến 6 lần.
Thí nghiệm được bố trí trong các điều kiện chiếu sáng khác nhau với các tỉ lệ ánh sáng đơn sắc của đèn LED như sau: 100% ánh sáng đỏ, 100% ánh sáng xanh, 90% đỏ + 10% xanh , 80% đỏ + 20% xanh , 70% đỏ + 30% xanh, 50% đỏ + 50% xanh, với đối chứng là ánh sáng đèn huỳnh quang và điều kiện trong buồng tối.
Bảng 2.1. Bố trí các nguồn ánh sáng trong các thí nghiệm. STT Ký hiệu Tỉ lệ ánh sáng đỏ (%) Tỉ lệ ánh sáng xanh (%) Ghi chú 1 D 0 0 Tối hoàn toàn 2 FL - - Đèn huỳnh quang 3 LR 100 0 100% ánh sáng đỏ 4 LB 0 100 100% ánh sáng xanh 5 R9B1 90 10 90% đỏ + 10% xanh 6 R8B2 80 20 80% đỏ + 20% xanh 7 R7B3 70 30 70% đỏ + 30% xanh 8 R5B5 50 50 50% đỏ + 50% xanh
2.2.1. Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của các điều kiện chiếu sáng và các tỉ lệ ánh sáng đơn sắc đến sự tái sinh chồi bất định từ mô lá cây Torenia in vitro.
Mẫu cấy lá Torenia in vitro được cấy vào môi trường MS cơ bản bổ sung 0,5 mg/l NAA, 0,5 mg/l BA, 30 g/l đường sucrose, 8 g/l agar, pH = 5,7 - 5,8. Mẫu cấy sau đó được đặt vào buồng sáng với tỉ lệ ánh sáng đơn sắc khác nhau (90% đỏ + 10% xanh , 80% đỏ + 20% xanh , 70% đỏ + 30% xanh, 100% đỏ, 100% xanh), đèn huỳnh quang và tối hoàn toàn.
Chỉ tiêu theo dõi: tỉ lệ hình thành chồi, tỉ lệ hình thành rễ, trọng lượng tươi, số chồi, chiều cao chồi, số rễ, chiều cao rễ và thực hiện sinh trắc nghiệm để khảo sát hàm lượng các chất điều hòa tăng trưởng thực vật nội sinh (IAA, Zeatin, ABA và GA3).