2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.1.2. Nguyên liệu thí nghiệm
Nguồn mẫu có sẵn tại Phòng Sinh học phân tử và Chọn tạo giống cây trồng, Viện Sinh học Tây Nguyên. Nguồn mẫuin vitro là mâũ lá của các cây Torenia, Sâm Ngọc Linh, Cát tường, Dâu tây, phôi lan Hồ điệp và PLB của Địa lan.
Hệ thống ánh sáng: Hệ thống đèn LED gồm có hai màu là xanh dương (xanh) và đỏ (công ty Ultra Light Electronic, Đài Loan) được bố trí ở các giàn riêng biệt. Đèn LED đỏ và LED xanh bao gồm nhiều đèn nhỏ kết hợp lại với nhau. Các giàn đèn được che kín xung quanh để các mẫu cấy chỉ chịu tác động của ánh sáng từ mỗi giàn đèn của từng thí nghiệm riêng biệt. Tỉ lệ ánh sáng đơn sắc của đèn LED được bố trí như sau: ánh sáng đỏ 100%, 90%, 80%, 70%, 50% và 0% lần lượt kết hợp với ánh sáng xanh 0%, 10%, 20%, 30%, 50% và 100%. Đối chứng là ánh sáng đèn huỳnh quang 1,2 m (FL – 40 W/T10, Công ty bóng đèn phích nước Rạng Đông, Việt Nam) có công suất 40 W, và điều kiện tối được bố trí trên giàn không có đèn chiếu sáng và được che kín xung quanh để các mẫu cấy không chịu ảnh hưởng của ánh sáng bên ngoài.
Môi trường nuôi cấy: Ba môi trường cơ bản được sử dụng trong các thí nghiệm là môi trường Murashige và Skoog (1962) (MS), môi trường Schenk và Hildebrandt (1972) (SH) và môi trường Vacin – Went (1949) (VW). Tùy thuộc từng thí nghiệm sẽ bổ sung các chất điều hòa sinh trưởng thực vật khác nhau (NAA, BA, TDZ, IBA, 2,4-D…).
Hấp khử trùng: Tất cả các môi trường trên được hấp khử trùng ở 121°C, áp suất 1 atm trong thời gian 30 phút.
Điều kiện thí nghiệm: Các mẫu cấy in vitro được nuôi cấy trên môi trường thích hợp và tùy mục đích thí nghiệm được đặt dưới các tỉ lệ chiếu sáng khác nhau trong các điều kiện như sau:
Thời gian chiếu sáng: 16 giờ/ngày. Ẩm độ trung bình: 75 – 85%.
Nhiệt độ trung bình ở không gian bên dưới hệ thống ánh sáng: 26±3°C. Cường độ chiếu sáng: 75 µmol.m-2.s-1.
Dụng cụ và thiết bị được sử dụng trong thí nghiệm: Autoclave, đũa khuấy, ống đong (100 ml, 250 ml và 1000 ml), phễu, becher nhựa (100 ml và 500 ml), dao mổ, kẹp cấy, đĩa cấy, bình thủy tinh thể tích 250 ml, đèn cồn, tủ cấy vô trùng, máy đo pH, kính hiển vi huỳnh quang, micropipette, dao lam, cân…