aeruginosa phân lập đƣợc
Mẫu nước thu thập và xử lý tương tự, sử dụng môi trường chọn lọc Difco-Pseudomonas isolation agar (môi trường của hãng Difco Laboratoties) để xác định. Trên môi trường này, vi khuẩn Pseudomonas phát triển mạnh tạo thành những khuẩn lạc màu xanh nhạt lá cây.
Giám định đặc tính dung huyết trên thạch máu bò 5%. Cách làm như sau: Thạch máu cơ bản Blood agar base sau khi hấp ở 121oC/20 phút, để nguội đến 40oC, bổ sung 5% máu bò tươi, đổ thạch đĩa, 20ml/đĩa.
Trên môi trường thạch máu, Pseudomonas aeruginosa tạo thành những khuẩn lạc dạng M (nhày, dình), sau khoảng 15-20 giây sẽ chuyển sang màu xanh nhạt.
Phản ứng thử oxidase: Dùng que cấy lấy một phần khuẩn lạc
Pseudomonas aeruginosa, di trên giấy thử oxidase, phản ứng dương tính khi giấy thử chuyển màu xanh.
Phản ứng thử catalase: Lấy một phần khuẩn lạc vi khuẩn kiểm tra di lên phiến kính sạch, nhỏ một vài giọt nước oxi già. Phản ứng dương tính khi có bọt sủi lên.
Thử khả năng lên men đường lactose: Tiến hành cấy vi khuẩn thử lên thạch MacConkey, bồi dưỡng trong tủ ấm 37o
C/24h, Pseudomonas aeruginosa do không lên men đường lactose nên khuẩn lạc có màu trắng đục (khuẩn lạc E. coli có màu đỏ cánh sen).
2.3.8. Phƣơng pháp xác định độc lực của các chủng vi khuẩn phân lập đƣợc đƣợc
Xác định độc lực của các chủng vi khuẩn E. coli, Pseudomonas phân lập được theo Quinn.P.J (1994) [40].
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
+ Cách pha: Cân 27 gam môi trường vào 1000ml nước cất. Lắc đều cho đến khi tan hoàn toàn.
Chia ra các ống nghiệm vô trùng 5ml/ống. Hấp ướt 121oC/15 phút.
Bảo quản ở nhiệt độ 4o C.
Dùng que cấy vô trùng lấy vi khuẩn đã được nuôi cấy ở 37o
C trong 24h trên môi trường MacConkey cho vào các ống môi trường BHI đã chế, đem nuôi trong tủ ấm 37o
C trong 24h.
Sau đó tiến hành tiêm phúc mạc chuột bạch với liều 0,2ml canh trùng/con. Theo dõi 7 ngày sau khi tiêm. Khi chuột chết, tiến hành mổ khám bệnh tích và phân lập vi khuẩn trên môi trường Macconkey.
- Chuột dùng làm đối chứng: Tiêm phúc mạc chuột bạch với liều 0,2 ml dung dịch BHI nguyên chất. Theo dõi 7 ngày sau khi tiêm. Khi chuột chết, tiến hành mổ khám bệnh tích và phân lập vi khuẩn trên môi trường Macconkey.