2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
3.5.3.Phương pháp phân lập nấm
Các nấm quan trọng sẽ ựược phân lập thuần nhằm ựánh giá ựặc ựiểm hình thái và làm nguồn cho các thắ nghiệm phòng trừ.
Mẫu nấm ựược phân lập từ hạt ngô sử dụng môi trường WA (water agar) và PDA (potato dextrose agar).
+ Cách chuẩn bị môi trường WA: Agar: 20 g và Nước: 1000 ml. đun tan agar trong 800 ml nước. Bổ xung nước cho ựủ 1000 ml. Hấp khử trùng ở 121oC /20 phút. để nguội 55-60 OC trước khi rót ra ựĩa petrị
+ Cách chuẩn bị môi trường PDA: Khoai tây: 200g, glucose : 20g, Agar: 20g và nước: 1000ml. Khoai tây rửa sạch, cắt lát, ựun trong nước 1 giờ,lọc qua vải lọc, bổ sung agar vào dịch lọc,và nước cho ựủ 1000 ml sau ựó ựun cho tan agar. Hấp khử trùng ở 1210C /20 phút. để nguội 55-600C trước khi rót ra ựĩa petrị
Trình tự phân lập nấm
Chuẩn bị:
* Dao mổ, kéo, panh, que cấy nấm.
* đèn cồn, giấy thấy thấm vô trùng, thớt nhựa, ựĩa môi trường
* Hoá chất khử trùng: Cồn (ethanol) 70%, NaOCl hoặc CăOCl)2 1-2 %
Tién hành:
* Khử trùng bề mặt hạt (tùy chọn) trong dung dịch khử trùng bề mặt như Ethanol 70%, NaOCl hoặc CăOCl)2 1-2 %. Thời gian khử trùng từ 1/2-1 phút.
* Rửa hạt lại bằng nước cất vô trùng * Thấm khô hạt bằng giấy thấm vô trùng
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 29
* Theo dõi sự phát triển của sợi nấm mọc ra từ mô bệnh. Khi nấm ựã phát triển từ mô bệnh ra môi trường, lấy phần ựỉnh sợi nấm chuyển sang môi trường PDA