2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
3.5.2. Phương pháp xác ựịnh thành phần nấm hại hạt ngô
Giám ựịnh nấm hại ngô theo tài liệu giám ựịnh bệnh hại hạt của Viện nghiên cứu Bệnh hại hạt giống đan Mạch, kiểm tra nấm bệnh tồn tại trên hạt ngô bằng phương pháp giấy thấm [37].
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 27
Phương pháp chia mẫu : mẫu ngô lấy về ựược trải ựều trên mặt phẳng theo hình vuông. Chia mặt phẳng thành 2 ựường chéo ựều nhaụ Lấy mỗi phần một lượng hạt nhất ựịnh sau ựó trộn ựều sao cho ựủ lượng mẫu kiểm trạ Lượng mẫu kiểm tra 300 hạt.
- Lấy 300 hạt/ 1 mẫu, chia thành 30 phần, mỗi phần 10 hạt . - Chuẩn bị ựĩa petri và giấy thấm
+ đĩa petri ựã ựược hấp khử trùng mỗi ựĩa ựặt 10 hạt + Giấy thấm trong hộp ựược khử trùng .
+ Lấy 3 tờ giấy thấm, nhúng vào nước cất sao cho toàn bộ giấy ựược thấm ướt ựều, sau ựó ựặt vào hộp petri ( 3 tờ / hộp)
Cách ựặt : Khử trùng bề mặt (tuỳ chọn): nhúng hạt 3 phút trong dung dịch
NaOCl 1%, sau rửa lại bằng nước cất vô trùng (tuỳ chọn) . đặt 10 hạt/ ựĩa Petri, ựặt thành 2 vòng ngoài cùng 9 hạt, 1 hạt ở trung tâm của ựĩạ Sau khi ựặt xong phải ghi mã số mẫu, ngày ựặt và ngày kiểm tra trên mặt ựĩa, ựem toàn bộ số ựĩa hạt ựã ựặt ựể trong phòng nuôi cấy ựảm bảo 12 giờ sáng, 12 giờ tối ở nhiệt ựộ 22-250C. Sau 7 ngày kiểm tra mẫu, ựem kiểm tra kỹ từng hạt dưới kắnh hiển vi soi nổi, khi phát hiện thấy nấm ở trên hạt tiến hành dùng kim khêu nấm ựặt trên lam kắnh ựể kiểm tra dưới kắnh hiển vi quang học.
Chỉ tiêu theo dõi tắnh tổng số hạt bị nhiễm bệnh trên tổng số hạt kiểm tra ựánh giá mức ựộ phổ biến của bệnh theo thang 4 cấp sau:
+ : Tỷ lệ hạt nhiễm nấm < 5% ++ : Tỷ lệ hạt nhiễm nấm từ 5% - 15% +++ : Tỷ lệ hạt nhiễm nấm từ 15 Ờ 25% ++++ : Tỷ lệ hạt nhiễm nấm ≥ 30%
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 28