3.1. T hiết bi và hóa chất
- Hệ thống thiết bị sắc ký lỏng (Shimadzu) bao gồm: Bơm cao áp LC-lOADvp
Bộ trộn dung môi Lò cột CTO 10AS Hệ điều khiển SCL 10A
Detector PDA (Photodiode array) SPD-M10A (Đèn D2 và W)
Cột Supelco LiChrospher RP-18, đường kính 6.1 mm ID, chiều dài 25 cm, c ỡ hạt 5 |im.
Ị*' ■ '■H * ■H * ' ì ? , ..Mịt&Ẽ*- , •
Hình 3.1: Hệ thống sắc kỷ lỏng Shimadzu
- Máy đo pH HANA 211, s ử dụng 2 dung dịch chuẩn pH = 4 (pha dung dịch kalidiftalat 0,1M), v à dune dịch chuẩn pH = 7 (pha 250ml dung dịch K H 2 P O 4
0,2M v à 250ml dung dịch Na2H P 0 4.12 H2O 0,2M, lắc đều 2 dung dịch).
17
P A I H Ọ C Q U O C G i A MẠ N ụ t Ị ^ M r - Ũ M T H Ò N G TIN T HƯ V I Ệ N
- Hóa chất: Các loại hóa chất dùng trong phép phân tích đều thuộc loại hóa chất tinh khiết phân tích (P.A.) của hãng Merck gồm axit axetic băng, axit tricloaxetic (TCA). Tất cả dung môi sử dụng thuộc loại siêu tinh khiết (Merck) như axetonitrin (ACN), metanol dành riêng cho HPLC và trước khi sử dụng đều được rung siêu âm để loại bỏ bọt khí, pha chế các dung dịch bàng nước cất 2
lần.
- Các dung dịch chuẩn : Các dung dịch chuẩn gốc của các vitamin gồm thiamin (106 mg/1), riboflavin ( 1 0 0 mg/1), niacin ( 1 1 1 mg/1), pyridoxin ( 1 0 0 mg/1), axit folic (200 mg/1) và cyanocobalamin (178 mg/1) được pha trong dung dịch axit axetic 2,4%. Các dung dịch chuẩn gốc được giữ trong tối và bảo quản ở nhiệt độ -20°c để tránh sự phân hủy của các vitamin. Hàng ngày sử dụng dung dịch chuẩn 1 0 mg/1 được pha loãng từ các dung dịch chuẩn gốc nói trên.
- Dung môi pha động chứa natri heptan sulfonat 5mM, natri dihidro photphat (NaH2P 0 4) 0,0IM, axit ortho phosphoric (H3PO4) được chuẩn bị như sau: cân l,203g natri heptan sulfonat và 1,2021 g natri dihidro photphat vào bình 1L, sau đó thêm nước cất đến khoảng 800 ml, lắc đều dung dịch. Tiếp đó, thêm axit ortho phosphoric để điều chỉnh đến pH = 3, rồi định mức bình đến 1L bàng nước cất, lắc đều để đồng nhất dung dịch và rung siêu âm trong 10 phút. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 |im trước khi đưa vào hệ thống HPLC.
- Dung dịch axit tricloaxetic (TCA) 4% được chuẩn bị như sau: cân 40 g axit tricloaxetic pha trong bình định mức 1L bằng nước cất tinh khiết hai lần.
- Dung dịch axit axetic 2,4% được chuẩn bị như sau: cân 24 g axit axetic pha trong bình định mức 1L bằng nước cất tinh khiết hai lần.
3.2. Xử lý mẫu phân tích
- Đổi với mẫu sữa bột trẻ em: Đồng nhất mẫu, cân lượng chính xác khoảng 5-10 gam mẫu trên cân phân tích có độ chính xác 0 , 0 0 0 1 gam vào ống ly tâm nhựa (50 ml). Thêm 15 ml dung dịch TCA 4%. Lắc đều, rung siêu âm, sau đó ly tâm gạn lấy dung dịch lớp trên vào bình định mức 25ml. Lặp lại quá trình chiết như trên với 10 ml TCA 4%. Gộp dịch chiết cả hai lần vào bình định mức 25 ml. Định mức đến vạch mức 25 ml bàng dung dịch TCA 4%. Lọc qua giấy lọc và màng lọc có kích thước lỗ 0,45 |im trước khi bơm vào hệ thống HPLC.
- Đổi với mẫu thuốc: Đồng nhất, nghiền mịn viên thuốc nếu là dạng bột. Cân 1 lượng chính xác khoảng 0,1 gam mẫu trên cân phân tích có độ chính xác 0,000 lgam, cho vào ống ly tâm nhựa (50 ml). Lắc đều với 10 ml dung dịch axit axetic 2,4%, rung siêu âm 45 phút, ly tâm 30 phút. Thu dịch lọc vào bình định mức 50 ml. Định mức đến vạch mức bằng dung dịch axit axetic 2,4%. Pha loãng mẫu theo tỷ lệ thích hợp để có nồng độ chất phân tích nằm trong đường chuẩn. Lọc dung dịch mẫu phân tích qua giấy lọc hoặc màng lọc kích thước lỗ 0,45 |im trước khi bơm mẫu vào hệ thống HPLC.