Trong những ca chẩn đoỏn cần thiết phải húa nghiệm phõn.
II.1. Xột nghiệm độ toan, kiềm của phõn
- Độ kiềm, toan của phõn tựy thuộc loại thức ăn. Gia sỳc ăn cỏ, mặt ngoài hũn phõn toan yếu, trong – kiềm. Phõn loài ăn thịt, hỗn thực thường kiềm, cũng cú khi toan hay trung tớnh.
- Trong ruột, thức ăn giàu protit phõn giải, phõn thường kiềm tớnh; loại giàu lipit và gluxit lờn men tạo ra nhiều axit bộo, phõn toan.
Phương phỏp xột nghiệm: Nhỳng giấy quỳ vào nước cất cho ướt sau đú ỏp nhẹ vào phõn và đọc kết quả.
Hoặc: Lấy 2-3 g phõn cho vào ống nghiệm, rồi cho thờm vào 4-5 lần nước cất và để yờn trong phũng 6-8 giờ. Nếu phần nước trờn trong: toan; đục: kiềm.
Trong chẩn đoỏn viờm ruột cần xột nghiệm độ toan, kiềm của phõn.
II.2. Xột mỏu trong phõn: Xột nghiệm được sử dụng trong trường hợp
nghi phõn lẫn mỏu nhưng mắt thường khụng xỏc định được. + Thuốc thử :
1/ Benzidin 1% trong axit axetic đặc (glycian, pha và dựng ngay). 2/ Nước oxy già (H2O2) 3%.
+ Cỏch làm: lấy 2- 3 g phõn cần kiểm nghiệm cho vào trong ống nghiệm, thờm vào 3-4 ml nước cất, ngoỏy cho tan rồi đun sụi. Để nguội, lấy vài giọt hỗn dịch trờn vào một ống nghiệm khỏc, thờm 10-12 giọt Benzidin 1% và cựng lượng nước oxy già 3%. Nếu hỗn dịch xuất hiện màu xanh: dương tớnh (cú mỏu).
Cú thể làm cỏch khỏc: 3g phõn, 1 ml axit axetic đặc, 1 ml ete (ether) etylic (ethylic); lắc đều và để yờn. Hỳt vài giọt phần trong ở trờn và thờm vào 10-20 giọt Benzidin 1%, nước oxy già cựng lượng. Hỗn dịch xuất hiệnmàu xanh: dương tớnh.
Cỏc phản ứng tỡm mỏu với thuốc thử benzidin đều dựa trờn nguyờn tắc: trong hồng huyết cầu cú men oxydaza, trong mụi trường toan tớnh, nú giải phúng oxy trong nước oxy già ra dưới dạng hoạt động. Oxy đú oxy húa men benzidin thành dẫn suất màu xanh.
Gia sỳc ăn thức ăn động vật (thịt, tiết, gan, ...), hai ngày sau phản ứng tỡm mỏu trong phõn vẫn cú thể cho kết quả dương tớnh. Do vậy, lỳc cần xột nghiệm mỏu trong phõn chú, mốo phải chỳ ý thức ăn cho chỳng một đến hai ngày trước.
II.3. Xột nghiệm sắc tố mật trong phõn
Trong phõn gia sỳc khỏe khụng cú Bilirubin, chỉ cú ớt Stecobilin nhuộm phõn thành màu hơi đen. Một số trường hợp bệnh lý (viờm gan, xơ gan, tụ mỏu, sỏn lỏ gan, trỳng độc, hoại tử gan) làm rối loạn trao đổi sắc tố mật và cần xột nghiệm phõn.
* Xột nghiệm định tớnh Stecobilin trong phõn:
+ Húa chất: Dung dịch HgCl2 bóo hũa (25g HgCl2,; 2,5g NaCl và 500 ml nước cất).
+Cỏch làm: Cho ớt phõn kiểm nghiệm và 10 ml HgCl2 bóo hũa, ngoỏy cho đều trong ống nghiệm và để yờn trong phũng 24 giờ. Hỗn dịch biến thành màu hồng chứng tỏ cú Stecobilin và tựy theo màu hồng đậm, nhạt mà phỏn đoỏn
lượng Stecobilin trong phõn.
* Xột nghiệm định lượng Stecobilin trong phõn:
+ Húa chất: 1/ FeSO4 16%; 2/ NaOH 10%; 3/ Axitacetic 15%; 4/ Ete ethylic; 5/ HCl đặc; 6/ Paradimethylaminobenzendehit; 7/ Dung dịch Natri acetat bóo hũa.
Dung dịch chuẩn: Trộn 5 ml dung dịch Na2CO3 (khan) bóo hũa với 94 ml nước cất và 1 ml Phenoltalein 0,05% (trong cồn 960). Dung dịch này cú màu tương đương màu của dung dịch cú nồng độ 0,4 mg% Stecobilin (cũng như Urobilin) sau khi đó cho những thuốc thử tương ứng.
Bộ thang mẫu: Dựng 5 ống nghiệm đồng đều (đường kớnh, độ dầy thành và màu thủy tinh). Cho vào ống thứ nhất 10 ml dung dịch chuẩn; ống thứ hai 7,5 ml dung dịch chuẩn + 2,5 ml nước cất; ống thứ ba cho 5 ml dung dịch chuẩn + 5 ml nước cất; ống thứ tư cho 2,5 ml dung dịch chuẩn + 7,5 ml nước cất và ống thứ năm cho 1,25 ml dụng dịch chuẩn + 8,75 ml nước cất. Dựng nỳt cao su đậy chặt và gắn kớn bằng Vaselin.
Năm ống trờn cú màu tương đương với cỏc nồng độ Stecobilin: 0,4; 0,3; 0,2; 0,1; 0,05 mg% (trong xột ngiệm này).
Cho cả năm ống theo thứ tự 1, 2, 3, ... vào giỏ, dựng giấy đen đậy kớn ỏnh sỏng để làm bộ thang mẫu để định lượng Stecobilin trong phõn và Urobilin trong nước tiểu.
Cỏch định lượng: Cõn 5g phõn tươi cho vào ống nghiệm đựng sẵn 20 ml nước cất, ngoỏy đều, thờm 20 ml dung dịch FeSO4 16%, lắc đều từ 30 – 40 lần, rồi cho thờm 20 ml dụng dịch NaOH 10%. Lắc 60 lần rồi lọc qua giấy lọc.
Đong lấy 10 ml nước lọc cho vào bỡnh gạn, thờm 3 ml axitacetic 15% (để toan húa) và 10 ml ete. Lắc bỡnh gạn trong 2 phỳt. Để yờn cho hỗn dịch lắng thành từng tầng. Đổ tầng nước dưới cựng. Rửa sạch phần ete bằng cỏch cho thờm 3 – 5 ml nước cất và lắc đều 30 – 40 lần, để cho lắng, bỏ phần nước ở dưới. Cho vào phần ete đó được rửa sạch một ớt andehit (khoảng bằng hạt kờ) và 1 ml HCL đặc, lắc đều trong 2 phỳt, cho thờm 3 ml Natri acetat bóo hũa, lắc
trong 1 phỳt. Phần dung dịch nhuộm màu hồng ở dưới được đổ qua 1 ống nghiệm cựng cỡ với ống chuẩn để so màu với thang mẫu.
Nếu màu quỏ đậm vượt ngoài thang mẫu thỡ phải pha loóng bằng cỏch cho thờm 1 ml HCL đặc, 3 ml Natriacetat bóo hũa và lắc đều trong 1 phỳt rồi đưa so màu.
X (mg% Stecobilin) = (H * K * 6 * 20)/100
H: lượng dụng dịch cuối cựng đưa so màu tớnh bằng ml K: Số mg Stecobilin của ống chuẩn cựng màu
* 6: Vỡ chỉ dựng 10 ml nước phõn trong 60 ml nước phõn đó hũa * 20: lượng phõn đưa kiểm nghiệm chỉ 5g
2.4. Xột nghiệm axit hữu cơ trong phõn
Lượng axit hữu cơ trong phõn phản ỏnh tỡnh trạng lờn men trong đường ruột.
- Húa chất: 1/ Fe2 (SO4)3 30%; 2/ Phenoltalein 1%; 3/ Ca(OH)2; 4/ Paradimethylaminoajobenzol; 5/ HCL 0,1N.
- Cỏch làm: Cõn 10g phõn cho vào trong 100 ml nước cất. Ngoỏy cho tan. Thờm vào 2 ml Fe2 (SO4)3 30%, 1,5 – 2 ml Phenoltalein 1% và 1 – 2g Ca(OH)2. Ngoỏy cho tan, hỗn hợp cú màu hồng. Để yờn 10 phỳt, đưa lọc. Đong lấy 25 ml nước lọc và dựng HCL 0,1N giọt cho đến lỳc xuất hiện màu vàng nhạt; hỗn hợp trung tớnh. Giọt 12 – 15 giọt chỉ thị màu Paradimethylaminoajobenzol và chuẩn độ bằng HCL 0,1N cho đến lỳc xuất hiện màu hồng đỏ thỡ thụi.
- Cỏch tớnh:
Lượng HCL 0,1N đó dựng (lần sau) * 4 = tương đương với lượng axit hữu cơ cú trong 10g phõn (cú thể tỡm ra g HCL tương đương lượng axit hữu cơ cú trong 100g phõn).
- Kiểm nghiệm NH3:
Lượng NH3 trong phõn phản ỏnh mức độ thối rữa, phõn giải protit trong đường ruột.
Chỳ ý: Phõn kiểm nghiệm phải tươi, khụng lẫn nước giải.
Cho 25ml nước lọc phõn đó trung hũa (như trờn) vào cốc, thờm 5ml foocmon trung tớnh (foocmon pha loóng cựng lượng với nước và trung hũa bằng NaOH 0,1N), và giọt Phenoltalein 1%. Chuẩn độ bằng NaOH 0,1N cho đến lỳc xuất hiện màu hồng bền thỡ dừng lại.
Lượng NaOH 0,1N đưa dựng * 4 biểu thị lượng Amoniac trong 10g phõn. Phõn gia sỳc khỏe cú 3,2 – 8 đơn vị chuẩn độ Amoniac.
Trong viờm ruột cata, nhất là ngựa, nếu độ Amoniac tăng – viờm cata kiềm; ngược lại, độ axit tăng – viờm cata toan.