b. Kiểm tra vi khuẩn trong nước sử dụng cho giết mổ * Phương pháp nuôi cấy xácđịnh TSVKH
3.5.3.2. Phát hiện và tính số lượng Coliforms, E.Coli có trong 1gram thịt:
Áp dụng theo quy trình xét nghiệm TCVN 5155 - 1990; lấy mẫu theo TCVN 5153 - 1990;
- Nguyên lý: dựa vào đặc điểm Coliformsphát triển lên men đường lactose, sinh hơi. Vi khuẩn E. coli phát triển tốt ở điều kiện 420C trên môi trường CLP (Canh thang Lactose đỏ Phenol) và khuẩn lạc E. coli xuất hiện màu ánh kim trên môi trường Endo. Số liệu thu thập được tra bảng MPN xác định số Coliforms và chỉ số E. coli.
Nuôi cấy: mẫu đồng nhất pha loãng ở 10-1, 10-2, 10-3,... tuỳ theo dự đoán mức độ ô nhiễm, hút 1ml mẫu pha loãng ở các đậm độ chuyển nuôi cấy trong ống môi trường CLP. Để xác định Coliforms mỗi đậm độ pha loãng cấy 5 ống, mỗi ống chứa 5ml môi trường CLP, để tủ ấm 370C. Để xác định E.
coli, mỗi đậm độ cũng cấy 5 ống như xác định Coliforms, nhưng khác ở chỗ
Đọc kết quả:
- Xác định và tính số lượng Coliforms: các ống môi trường CLP, nuôi cấy ở nhiệt độ 370C, 24h, màu môi trường chuyển từ hồng đỏ chuyển sang vàng (phản ứng lên men đường lactose dương tính, làm thay đổi pH vì thế môi trường chuyển sang mầu vàng), trong ống duharm có sinh hơi. Ghi chép các ống dương tính, tra bảng MPN để tính Coliforms tổng số.
- Xác định và tính chỉ số E. coli:
Sau nuôi cấy 24 - 48h, từ các ống CLP dương tính (môi trường chuyển màu từ hồng đỏ sang vàng, có sinh khí trong ống Duharm), cấy chuyển sang môi trường thạch Endo. Khuẩn lạc E. coli sinh ánh kim trên môi trường Endo sau khi nuôi cấy ở 420C/24h.
Để xác định chính xác E. coli, từ khuẩn lạc có ánh kim, cấy chuyển khuẩn lạc sang môi trường thạch máu để tủ ấm 420C/24h. Ghi chép các ống nghiệm dương tính, tra bảng MPN sẽ được số gần đúng trực khuẩn E. coli/1g
mẫu xét nghiệm.
Giám định E. coli bằng hệ thống phản ứng IMVIC, nếu là E. coli : + Phản ứng đỏ Methyl: dương tính (M+) làm môi trường có mầu đỏ. + Phản ứng Indol: dương tính (I+), làm môi trường có mầu đỏ.
+ Phản ứng Voges - proskauer: âm tính (Vi-), không mầu hoặc mầu vàng. + Phản ứng Simmons - Citrat: âm tính (C-).
Tính kết quả, tra bảng MPN sẽ được số gần đúng trực khuẩn E. coli.