b. Kiểm tra vi khuẩn trong nước sử dụng cho giết mổ * Phương pháp nuôi cấy xácđịnh TSVKH
3.5.3. Phương pháp xácđịnh mứcđộ nhiễm vi khuẩn đối với thịt 1 Phương pháp xác định TSVKHK trong mẫu thịt:
và chuẩn bị mẫu theo TCVN 4833 - 1÷ 2: 2002.
- Nguyên lý: Trên môi trường thạch thường, ở điều kiện hiếu khí, nhiệt độ 370C, sau 24h, mỗi khuẩn lạc phát triển riêng rẽ là một điểm xuất phát của một vi khuẩn. Do vậy số khuẩn lạc đếm được trên đĩa thạch chính là số vi khuẩn chứa trong mẫu phân tích.
- Chuẩn bị mẫu:
Cân 25g thịt (loại bỏ mỡ, gân, bạc nhạc) cho vào túi P.E chuyên dụng vô trùng, bổ sung thêm 225ml dung dịch đệm peptone. Đồng nhất mẫu bằng máy Stomacher, thời gian 1 phút. Hỗn dịch thu được có tỷ lệ mẫu pha loãng 10- 1. Từ hỗn dịch này có thể phã loãng mẫu 10- 2, 10- 3,... tuỳ theo mức độ đánh giá ô nhiễm để xác định mức pha loãng.
- Nuôi cấy:
Một mẫu kiểm nghiệm phải nuôi cấy ít nhất 3 đậm độ, mỗi đậm độ cấy vào 2 đĩa thạch. Lấy 1ml hỗn dịch đồng nhất mẫu pha loãng ở những đậm độ khác nhau rồi chuyển vào giữa đĩa petri. Môi trường thạch PCA (Plate Count Agar) hòa tan, hấp vô khuẩn để nguội khoảng 450C, đổ vào từng đĩa khoảng 12 - 15ml thạch, trộn đều bằng cách xoay nhẹ đĩa 1 - 2 vòng theo kim đồng hồ và quay ngược lại. Để đĩa thạch đông tự nhiên trên mặt phẳng nằm ngang. Sau đó, lật ngược đĩa chuyển vào tủ ấm 370C, 24h đọc kết quả.
Tài liệu của Newzealand (1991) cho biết dùng kỹ thuật đổ đĩa sẽ làm tổn thương vi khuẩn, nhất là đối với mẫu thịt được bảo quản trong điều kiện nhiệt độ thấp. Vì vậy, có thể sử dụng phương pháp cấy láng trên thạch. Các đĩa thạch đã chuẩn bị trước (rót 12 - 15ml thạch vào hộp lồng, để nguội). Dùng pipét vô khuẩn hút 01ml hỗn dịch mẫu pha loãng ở những đậm độ khác nhau cho vào giữa đĩa thạch, dùng que gạt thuỷ tinh láng cho tới khi mẫu được phân bố đều trên mặt thạch.
- Tính kết quả:
nhất đưa lên giá kính có chia ô, hoặc dùng bút chì kính kẻ ô trên mặt sau đĩa, thực hiện đếm theo thứ tự tránh nhầm lẫn. Nên chọn những đĩa có dưới 300 khuẩn lạc để đếm, nếu số khuẩn lạc quá dày vượt quá 300/đĩa petri việc đếm sẽ không chính xác, mẫu cần phải làm lại và pha loãng tiếp.
Tổng số vi khuẩn hiếu khí trong 1g mẫu được tính theo công thức sau:
ΣC
N= (W1 + 0.1W2).d1 Trong đó:
C: Là số khuẩn lạc đếm được trên các đĩa đã chọn.
W1, W2 : Số đĩa ở 2 độ pha loãng liên tiếp đã chọn thứ nhất và thứ 2. d1 : Là hệ số của đậm độ pha loãng đã chọn thứ nhất.
N: Là số khuẩn lạc trong 1gram mẫu kiểm tra, N biểu thị kết quả dưới dạng thập phân giữa 1,0 và 9,0 nhân với 10w (w là số mũ thích hợp của 10).