Phản ứng giải trình tự DNA được thực hiện trên máy xác định trình tự DNA tự
3.4.Thu nhận và đánh giá tính kháng nguyên của protein gp120B tái tổ hợp 1 Tinh chế protein gp120B tái tổ hợp
3.4.1. Tinh chế protein gp120B tái tổ hợp
Immidazol được sử dụng là chất cạnh tranh Ni2+ trong phức hợp Ni2+ -Histidine. Do protein tái tổ hợp có 6Histidine ở đầu C và đầu N nên chúng có ái lực cao với ion Ni2+ trên cột hơn so với các protein của chủng có mang Histidine. Các protein có ái lực yếu hơn sẽ bị đẩy ra khỏi cột nhờ nồng độ Immidazol. Sau khi rửa cột để loại bỏ các protein tạp nhiễm bám không đặc hiệu, protein tái tổ hợp được đẩy ra khỏi cột bằng 250 mM Immidazole, các phân đoạn đẩy ra khỏi cột được kiểm tra bằng điện di trên gel polyacrylamide 12,5% trong điều kiện biến tính có SDS.
Khoa Công nghệ sinh học 53
Hình 3.13: Kết quả tinh sạch protein tái tổ hợp được kiểm tra bằng điện di trên gel poly acrylamid
ĐC 1: Thang protein chuẩn (Fermentas), ĐC 2-6: Các phân đoạn đẩy ra khỏi cột sau khi tinh sạch, ĐC 7: Dịch DBB1, ĐC 8: Dịch NWB1, ĐC 9: Dịch phá tế bào bằng siêu âm, ĐC 10: Dịch chảy qua cột
Kết quả trên hình ảnh điện di (Hình 3.13) cho thấy, ở ĐC 10 dịch qua cột, ĐC 7 dịch DBB 1, ĐC 8 dịch NWB 1, không thấy xuất hiện băng protein chứng tỏ protein bám tốt trên cột. Lượng protein thu được nhiều nhất ở 3 phân đoạn đầu, sau đó hàm lượng giảm dần cho đến phân đoạn cuối. GP120B tái tổ hợp tinh chế có độ tinh sạch cao, có thể sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo. Các phân đoạn chứa gp120 tinh sạch (phân đoạn 1-5 tương ứng với ĐC 2-6) được thu lại và thẩm tích qua đêm trong đệm PBS pH=7,4 để làm hồi tính protein và sử dụng cho các phản ứng tiếp theo.
Khoa Công nghệ sinh học 54