CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.3. Thẩm định qui trình định lượng bằng phương pháp UV-Vis
Hoạt chất Trimetazidin dihydrochlorid được tiến hành định lượng hàm lượng nguyên liệu, bán thành phẩm, thành phẩm trong môi trường acid HCl 0,1 N, đồng thời định lượng độ phóng thích hoạt chất ở từng thời điểm trong ba môi trường là môi trường acid HCl 0,1 N (pH 1,2), môi trường đệm phosphat pH 4,5 và pH 6,8. Do đó, qui trình
định lượng được yêu cầu thẩm định trong cả ba môi trường hòa tan tương ứng. 2.4.3.1. Tính tuyến tính
Nguyên tắc
Khoảng tuyến tính được xác định bằng cách đo độ hấp thu những mẫu đối chiếu có nồng độ khác nhau bằng phương pháp đo quang phổ UV-Vis ở bước sóng 231 nm. Phương trình hồi quy tuyến tính được xác định bằng phương pháp bình phương cực tiểu (sử dụng công cụ Regression trong MS-Excel).
Tiến hành
Dung dịch gốc (100 mcg/ml): Cân chính xác khoảng 10 mg Trimetazidin dihydrochlorid chuẩn chuyển vào bình định mức 100 ml. Hòa tan và điều chỉnh đến vạch bằng môi trường hòa tan.
Bảng 2.7. Cách pha mẫu xác định tính tuyến tính Số dung dịch đo 1 2 3 4 5 6 7 V dung dịch gốc (ml) 2 3 4 5 6 7 8 Vmôi trường (ml) vđ 25 ml 2.4.3.2. Tính đặc hiệu Nguyên tắc
Đảm bảo kết quảđịnh lượng hàm lượng chất cần phân tích là chính xác, tránh sự nhiễu của các thành phần khác có trong mẫu.
Tiến hành
- Chuẩn bị mẫu: mẫu chuẩn, mẫu trắng (thành phần giống mẫu thử nhưng không chứa hoạt chất cần thử) và mẫu giảđịnh (mẫu trắng thêm chuẩn).
- Xác định nồng độ mẫu chuẩn và mẫu giả định ở cùng nồng độ bằng phương pháp UV-Vis, tiến hành 6 lần.
Dùng kết quả trắc nghiệm F-test và t-test kết luận ảnh hưởng của tá dược đến kết quả định lượng hoạt chất.
2.4.3.3. Độ lặp lại
Nguyên tắc
Chế phẩm được làm đồng nhất và được chuẩn bị thành 6 mẫu thử khác nhau. Tiến hành định lượng xác định độ lệch chuẩn tương đối.
Yêu cầu: phương pháp phải có độ lệch chuẩn tương đối RSD < 2%.
Tiến hành
Cân 20 viên thuốc bất kỳ, tính khối lượng trung bình của một viên. Nghiền trộn kỹ
cụ và thời gian) 6 mẫu thử tương tựMục 2.4.2. trong từng môi trường hòa tan tương
ứng.
Xác định hàm lượng hoạt chất từ mỗi mẫu thử, xác định hàm lượng trung bình, độ
lệch chuẩn, độ lệch chuẩn tương đối (CV%). 2.4.3.4. Độđúng
Nguyên tắc
Độđúng của phương pháp được thực hiện bằng phương pháp thêm chuẩn vào mẫu thử
với lượng bằng 85%, 100%, 115% so với lượng mẫu thử. Thực hiện 3 mẫu mỗi mức, tính tỷ lệ phục hồi.
Yêu cầu: tỷ lệ hồi phục chất chuẩn phải nằm trong khoảng 100 ± 2%.
Tiến hành
Dung dịch chuẩn gốc và dung dịch thử gốc: thực hiện tương tựMục 2.4.2. trong từng môi trường hòa tan tương ứng.
Pha mẫu thử thêm chuẩn được tiến hành như trong Bảng 2.8.
Bảng 2.8. Cách pha mẫu xác định độđúng Thử thêm chuẩn Mẫu 85% 100% 115% Thử Chuẩn Vdung dich thử gốc (ml) 2,0 2,0 2,0 9,0 0,0 Vdung dịch chuẩn gốc (ml) 5,95 7 8,05 0,0 9,0
Điều chỉnh về 50ml bằng môi trường hòa tan.