- Khử trùng mẫu
+ Thao tác ngoài tủ cấy: cắt các chồi mầm đang tái lập tăng trưởng trên củ Nghệđen trong vườn sau hai tuần trồng và rửa dưới vòi nước sạch. Dùng gòn thấm nước xà phòng lau sạch bề mặt ngoài các chồi. Sau đó lắc mẫu trong dung dịch xà phòng loãng 15 phút và rửa lại bằng nước máy 3 lần cho sạch.
+ Thao tác trong tủ cấy: chuyển mẫu vào erlen sạch, lắc mẫu bằng cồn 70o trong 1 phút và rửa mẫu bằng nước cất vô trùng 3 lần. Tiếp tục khử trùng mẫu bằng dung dịch HgCl2
- Môi trường
0,1% trong 15 phút và rửa lại bằng nước cất vô trùng 3 – 5 lần. + Các môi trường nuôi cấy sử dụng trong các thí nghiệm là môi trường MS (Murashige và Skoog, 1962) bổ sung đường sucrose 30 g/l. Tùy các thí nghiệm mà môi trường nuôi cấy có bổ sung các chất điều hòa tăng trưởng thực vật khác nhau.
+ Môi trường được làm rắn bằng agar với nồng độ 6 g/l.
+ pH môi trường trước khi hấp là 5,8 ± 1 (được điều chỉnh bằng NaOH 1N và HCl 1N).
+ Môi trường được hấp khử trùng bằng autoclave ở 1 atm, 121 0
- Điều kiện nuôi cấy:
C trong 20 phút.
+ Thời gian chiếu sáng: 16 giờ/ngày. + Cường độ ánh sáng: 2500 ± 200 lux + Nhiệt độ phòng nuôi: 250
C ± 20
- Mẫu cấy sau khi khửtrùng được cắt bỏ các phần bên ngoài do bị tổn thương khi tiếp xúc với các dung dịch khử trùng. Cấy mẫu vào ống nghiệm chứa 10 ml môi trường MS.
C + Độẩm: 55 ± 10%.
- Tạo cụm chồi để làm nguyên liệu cho các thí nghiệm tiếp theo: khúc cắt thân của các cây con sau sáu tuần tuổi được cấy vào môi trường MS bổ sung BA 2 mg/l và IBA 0,5 mg/l.