4,6 N. Gộp chung các phần lỏng để xác định hàm lượng đường theo đường chuẩn. Quy đổi ra hàm lượng tinh bột theo lượng đường thủy giải nhân với hệ số 0,9.
Phần giữa củ cấp một (khi chia củ cấp một thành ba phần có chiều dài bằng nhau) ở giai đoạn 4, 6, 8 và 10 tháng tuổi của cây Nghệ đen trong vườn được dùng đểly trích và đo hoạt tính chất điều hòa tăng trưởng thực vật bằng phương pháp trên sắc kí bản mỏng Silicagel F254 (Bùi Trang Việt, 1992; Meidner, 1984; Yokota, 1980), trong hệ dung môi là chloroform: metanol: acid acetic (theo tỷ lệ 80: 15: 5), ở nhiệt độ 300C (hình 2.1).
Vị trí của IAA, ABA và zeatin trên bản sắc kí được phát hiện trực tiếp dưới tia UV 254 nm so với chuẩn là IAA, ABA và zeatin.
Vị trí của GA3 được phát hiện bằng cách phun hỗn hợp acid sulfuric-ethanol (5: 95) lên bản sắc kí, đem sấy ở 1100C trong 10 phút và quan sát dưới tia UV 254 nm so với chuẩn là GA3.
Hoạt tính của IAA, Zeatin, GA3 và ABA được xác định bằng các sinh trắc nghiệm. Hoạt tính auxin và acid abscisic được đo bằng sinh trắc nghiệm với diệp tiêu lúa (Oryza sativa L.). Sựgia tăng về chiều dài diệp tiêu lúa được đo sau 24 giờ, trong tối. Hoạt tính auxin tỷ lệ thuận với sự sai biệt chiều dài khúc cắt diệp tiêu so với chuẩn (dung dịch IAA 1 mg/l). Hoạt tính acid abscisic tỷ lệ nghịch với sự sai biệt chiều dài khúc cắt diệp tiêu so với chuẩn (dung dịch ABA 1 mg/l).
Hoạt tính cytokinin được đo bằng sinh trắc nghiệm với tử diệp dưa chuột (Cucumis sativus L.). Hoạt tính cytokinin tỷ lệ thuận với sự sai biệt trọng lượng tươi của các tử diệp so với chuẩn (dung dịch Zeatin 1 mg/l) sau 48 giờ chiếu sáng.
Hoạt tính gibberellin được đo bằng sinh trắc nghiệm với cây mầm xà lách (Lactuca sativa L.). Hoạt tính gibberellin tỷ lệ thuận với sự sai biệt chiều dài trụ hạ diệp so với chuẩn (dung dịch GA3 10 mg/l) sau 72 giờ chiếu sáng.
Hình 2.1. Sơ đồ ly trích và cô lập các chất điều hòa tăng trưởng thực vật. Dịch nước (lớp dưới)
Sắc ký
Dịch eter
Sắc ký Sinh trắc nghiệm
auxin, acid abscisic và giberelin
Sinh trắc nghiệm cytokinin Nghiền mẫu + methanol 80%
Dịch tan trong nước ≈ 1 ml
Dịch eter (lớp trên) Dịch nước (bỏ) Cô cạn pH = 2,5 Trích với eter (3 lần) Cô cạn Cô cạn pH = 7 Trích với eter (3 lần) Dịch eter NaHCO3 8% (3 lần) Dịch eter NaHCO3 8% (3 lần)