Kết quả CK của các đối tượng được so sánh với trị số bình thường của trẻ em và người lớn:
+ Trẻ em nam từ 1-15 tuổi: 115,0 ± 32,0 UI/L + Trẻ em nữ từ 1-15 tuổi: 102,8 ± 36,3 UI/L + Phụ nữ bình thường: 86,3 ± 28,2 UI/L
Trong chẩn đoán bệnh DMD, nghi ngờ người nữ là dị hợp tử khi hoạt độ enzym CK tăng gấp đôi giá trị trung bình của hằng số trên:
+ Với trẻ em nữ dưới 15 tuổi: CK > 205,6 UI/L + Phụ nữ: CK > 172,6 UI/L
2.3.11. Chẩn đoán trước sinh bệnh DMD
Các người mẹ được xác định ở trạng thái dị hợp tử, nếu tiếp tục mang thai sẽ được tiến hành chẩn đoán trước sinh để xác định tình trạng bệnh lý của thai nhi.
2.3.11.1. Chọc hút dịch ối
Được tiến hành vào tuần thứ 14-18 của thai kỳ dưới sự hướng dẫn của siêu âm. Thủ thuật được tiến hành tại Bệnh viện Phụ Sản Trung Ương.
2.3.11.2. Nuôi cấy dịch ối [11], [71]
Nuôi cấy tế bào dịch ối ngoài mục đích làm tăng số lượng mẫu, nú cũn giỳp loại bỏ các tế bào máu mẹ lẫn vào mẫu bệnh phẩm.
- Quy trình nuôi cấy:
+ Ly tâm dịch ối 200 vòng trong 10 phút, loại bỏ dịch nổi, giữ lại cặn, + Hòa tan cặn tế bào, chia đều vào hai bình nuôi cấy. Bổ sung 2 ml môi trường AMNIOMAX để tạo các tế bào sợi bám dính vào mặt bình nuôi cấy.
+ Để vào tủ ấm 37°C với 5% CO2 và 95% không khí cùng với nguồn ẩm. Nuôi cấy tế bào theo hệ thống cấy hở.
+ Thay môi trường nuôi cấy khi tế bào ối đó bỏm dính vào bình nuôi cấy. Thay toàn bộ môi trường lần đầu tiên sau 5-7 ngày, sau đó tiến hành thay môi trường 2 lần trong 1 tuần cho đến lúc thu hoạch tế bào. Thời gian trung bình nuôi cấy là từ 7-15 ngày.
- Thu hoạch tế bào: các tế bào thu được với số lượng tương đối sau khi nuôi cấy sẽ được tách DNA và sử dụng kỹ thuật PCR để phân tích gen dystrophin
2.3.11.3. Tách DNA của tế bào ối
Sử dụng phương pháp phenol-chloroform để tách chiết DNA của tế bào ối. Phương pháp này đã được trình bày ở phần 2.3.2.
2.3.11.4. Xác định giới tính của thai nhi
Sử dụng cặp mồi đặc hiệu khuếch đại vùng gen xác định giới tính SRY
(có kích thước 254 bp) đặc hiệu trên NST Y: - Thành phần phản ứng:
Thành phần Thể tích (μl)
10 x buffer 2,0
2,5 mM dNTP 2,0
Taq polymerase (Takara, Japan) 0,2
10 pmol mồi xuôi 1,0
10 pmol mồi ngược 1,0
DNA tế bào ối (100 ng) 1,0
Nước cất 12,8