Dụng cụ: Phải được vô trùng tuyệt đối (hấp ướt 120°C trong 20 phút)

Một phần của tài liệu xác định đột biến mất đoạn gen dystrophin gây bệnh loạn dưỡng cơ duchenne ở mức độ mrna và phát hiện người lành mang gen bệnh (Trang 39 - 41)

- Nhóm nghiên cứu:

2.2.1. Dụng cụ: Phải được vô trùng tuyệt đối (hấp ướt 120°C trong 20 phút)

- Máy Gene Amp PCR System 9700 (USA),

- Tủ lạnh sâu: -30°C; -80°C (SANYO), máy điện di: Mupid (Nhật Bản), - Máy soi gel và chụp ảnh tự động thạch đã điện di: (Dolphin Chemi Wealtec, USA),

- Máy quang phổ kế Thermo Electron Corporation của hãng Biomate, - Máy điện di mao quản Agilent 2100 Bioanalyzer,

- Máy ly tâm lạnh Beckman (USA) và ly tâm để bàn Eppendorf (Đức), - Lò vi sóng (Samsung), tủ ấm, pipet, đầu cụn cỏc loại,

- Tủ nuôi cấy có chế độ lắc,

- Máy đọc trình tự gen 3100-Avant Genetic Analyzer của hãng ABI-PRISM - Eppendorf 1,5 ml, ống Falcol, cóng đo sạch,

- Chai nuôi cấy tế bào: diện tích mặt đáy 25 cm2, nhãn hiệu Nunc.

2.2.2. Hóa chất

* Hoá chất dùng để tách chiết DNA:

- Dung dịch lysis buffer, dung dịch K, dung dịch SDS 10%, - Proteinase K (10 mg/l),

- Dung dịch phenol : chloroform : isoamyl với tỷ lệ 25:24:1, - Dung dịch chloroform : isoamyl với tỷ lệ 24:1,

- Ethanol 100%, ethanol 70%, sodium acetate 3M, pH=5,2,

* Hóa chất tách chiết RNA tổng số (Wako):

+ Isogen, Isopropanol, ethanol 70%, DEPC - water.

* Hóa chất tổng hợp cDNA (Invitrogen):

+ Random primer, dNTP 10mM, PCR buffer 5X,

+ DTT 0,1M (proteinase inhibitor), HPRI (RNAase inhibitor), + MMLV-RT (enzym tổng hợp ngược).

* Hóa chất chạy PCR (Invitrogen):

+ 10 X buffer, dNTP mix, Taq polymerase, + Các cặp mồi (xuôi và ngược).

* Hoá chất nhân dòng gen:

+ Vector tạo dòng, môi trường nuôi cấy khuẩn lạc, + X-gal, ITPG, kháng sinh.

* Hoá chất để đọc trình tự:

+ Big dye, cột lọc.

* Hóa chất nuôi cấy tế bào ối:

+ Môi trường nuôi cấy AmnioMax của hóng Gibco, + Huyết thanh bê, trypsin 2,5%,

Một phần của tài liệu xác định đột biến mất đoạn gen dystrophin gây bệnh loạn dưỡng cơ duchenne ở mức độ mrna và phát hiện người lành mang gen bệnh (Trang 39 - 41)

Tải bản đầy đủ (DOC)

(111 trang)
w