3.3.5.1 Thử nghiệm catalase
Nguyên tắc:
Các vi sinh vật hiếu khí chứa chuỗi truyền điện tử có cytochrome đều có enzyme catalase. Enzyme này là một trong những enzyme có vai trò bảo vệ tế bào khỏi các tổn thương bởi các dẫn xuất độc tính cao của oxy phân tử trong tế bào hiếu khí. Các vi sinh vật này có khả năng biến dưỡng năng lượng theo phương thức hô hấp với oxi là chất nhận điện tử cuối cùng trong chuỗi truyền điện tử tạo H2O2. Catalase thủy phân H2O2 thành H2O và O2, ngăn cản sự tích tụ của phân tử có độc tính cao trong tế bào.
Tiến hành:
Sử dụng dung dịch H2O2 3% (hay còn gọi là oxy già).
Hoạt hóa vi khuẩn trong thạch MRS, ủ kỵ khí 35oC trong 48 giờ.
Dùng que cấy lấy một ít sinh khối từ khuẩn lạc thuần đặt lên phiến kính sạch, nhỏ một giọt H2O2 3% lên sinh khối vi khuẩn trên phiến kính và quan sát.
Nếu dương tính sẽ xuất hiện sủi bọt khí, âm tính không thấy sủi bọt. Chủng LAB cho phản ứng catalase âm tính, không thấy hiện tượng sủi.
3.3.5.2 Thử nghiệm khảnăng sinh acid
Nuôi vi khuẩn trên môi trường lỏng sau hai ngày lấy dịch môi trường nuôi cấy đi chuẩn độ theo phương pháp chuẩn độ Thorner (°Th), ống nào có độ Thorner lớn hơn ống trắng chuẩn (môi trường không có vi khuẩn) thì dương tính.
Độ Thorner (°Th): là số ml dung dịch NaOH N/10 cần thiết để chuẩn độ 10ml dung dịch nuôi cấy có bổ sung phenoltalein cho đến khi xuất hiện màu hồng bền 20s.
3.3.5.3 Thử nghiệm khảnăng lên men các loại đường
42
Nhằm xác định khả năng lên men một loại cacbohydrate đặc hiệu có trong môi trường cơ bản của vi sinh vật. Khi lên men cacbohydrate, vi sinh vật sẽ tạo ra môi trường có những acid hữu cơ và làm giảm pH.
Tiến hành:
Chuẩn bị các ống môi trường thử nghiệm đường có pH chứa ống Dulham đem hấp vô trùng 15 phút/121°C, atm.
Các loại đường: glucose, sucrose, lactose, sorbitol được thử nghiệm trong môi trường nuôi cấy MRS. Lượng đường sử dụng tương ứng với thành phần đường glucose trong môi trường MRS dịch thể. Nhỏ thuốc thử vào dung dịch môi trường nuôi cấy, môi trường chuyển màu đỏ. Cấy vi sinh vật từ môi trường thạch nghiêng ủ trong 24 giờ vào các ống nghiệm có chứa đường chuẩn bị trước, đem ủ ở điều kiện thích hợp (37°C) trong 48 giờ. Quan sát sự đổi màu của môi trường với chất chỉ thị màu phenol red. Kết quả khi môi trường chuyển sang màu đỏ hay có ống sinh hơi (làm nổi các ống Dulham) và âm tính khi môi trường vẫn giữ nguyên màu môi trường.