3.3.1.1 Quy trình lấy mẫu
Dịch ruột non và ruột già của heo con (dưới 15 ngày tuổi) được lấy tại một trại chăn nuôi heo ở huyện Trảng Bom – Đồng Nai.
Hấp khử trùng toàn bộ dụng cụ lấy mẫu. Mỗi mẫu lấy 5g.
38
3.3.1.2 Phân lập
Nguyên tắc:
Phương pháp tạo thuần chủng dựa trên một số kỹ thuật pha loãng kết hợp với điều kiện nuôi cấy chọn lọc ưu thế tăng trưởng cho những chủng quan tâm. Đối với vi khuẩn, để phân lập ta thực hiện phương pháp trải trên môi trường rắn chọn lọc cho các khuẩn lạc mọc tách rời ra, quan sát và chọn những khuẩn lạc đặc trưng của vi khuẩn sau đó thực hiện cấy ria để làm thuần những khuẩn lạc chọn lọc được.
Tiến hành:
Sau khi lấy mẫu, chúng tôi tiến hành phân lập vi sinh vật trong đường tiêu hoá của lợn. Quy trình như sau:
Môi trường: Chuẩn bị môi trường phân lập MRS agar, đổ vào đĩa Petri đã hấp tiệt trùng và để đông tự nhiên.
Giữ môi trường trong 24 giờ để kiểm tra và loại bỏ những môi trường nhiễm vi sinh vật lạ.
Thu mẫu và pha loãng với dung dịch nước muối sinh lý 0,85% với nồng độ pha loãng từ cấp số 1 đến cấp số 6 (10-1 đến 10-6). Chọn bốn nồng độ pha loãng cuối và nhỏ 100µl dung dịch ở mỗi nồng độ pha loãng lên môi trường MSR thạch đĩa đã chuẩn bị ở trên, trải đều bằng que trang đến khô (mỗi mẫu thí nghiệm được trãi trên 3 đĩa môi trường thạch.)
Đếm số khuẩn lạc để kiểm tra mật độ của từng chủng vi sinh vật trong mẫu phân và dịch ruột của lợn
Chọn những đĩa có khuẩn lạc tách rời nhau, khuẩn lạc màu trắng, hình dạng và kích thước đặc trưng
39