3.1.1 Đối tượng nghiên cứu
Trong nghiên cứu này, chúng tôi quan tâm đến nhóm vi khuẩn probiotics được phân lập và chọn lọc hoạt tính từ hệ vi sinh vật đa dạng trong mẫu ruột non và ruột già của hệ đường ruột heo con trong giai đoạn cai sữa hoặc dưới 15 ngày tuổi đang được nuôi bằng sữa mẹ.
3.1.2 Dụng cụ và trang thiết bị
Dụng cụ:
Các loại đĩa Petri, que cấy, ống nghiệm, ống đong, erlen, bình định mức,… và các dụng cụ cần thiết khác để thu mẫu.
Trang thiết bị:
Tủ sấy Convection Oven/Mov-212F
Bếp đun, khuấy từ Hotplate stirrer SB 162-3 Staurat pH kế Eutech instruments pH 510
Nồi hấp tiệt trùng Hirayama HV85 Tủ cấy Captair flow (flowcap 700) Tủ ủ
Tủ lạnh
Quang phổ Thermo Spectronic (genesys 20) Máy ly tâm Hettich zentrifugen Mikro22R Cân Sartorius CP2202 S và Sartorius CP224S Kính hiển vi Olympus.
Máy vortex. Lò viba.
3.1.3 Hóa chất và nguyên liệu
33
Thuốc thử: Phenol red, Phenolphtalein. Thuốc thử phenol red:
Thành phần: Phenol red: 0,1g Etanol: 300ml Nước cất: 200ml
Phenol red là thuốc thử dựa trên chỉ số pH. pH trên 8,2 dung dịch có màu hồng sáng, còn pH dưới 6,8 dung dịch có màu vàng [ 35].
Thuốc thử catalase (H2O2 3% hay còn gọi là oxy già) Các loại đường sucrose, lactose, glucose, sorbitol.
Dung dịch NaOH 0,1N, HCl đậm đặc và dung dịch HCl 1N.
3.1.4 Môi trường sử dụng MT1: Môi trường MRS dịch thể Pepton: 10g Cao thịt: 10g Cao nấm men: 5g Glucose: 20g K2HPO4: 2g CH3CO2Na: 5g (NH4)2citrate: 2g MgSO4.7H2O: 0,2g MnSO4.H2O: 0,05g Tween 80: 1ml Nước cất đủ 1l.
MT2: Môi trường MRS agar
Thành phần giống môi trường MRS dịch thể, bổ sung thêm agar 20g/l.
MT3: Môi trường NB
34 Cao nấm men: 5g
NaCl: 5g Nước cất đủ 1l
MT4: Môi trường NA
Thành phần giống môi trường NB dịch thể có bổ sung thêm agar 20g/l.
MT5:Môi trường lên men các nguồn cacbohydrate
Sử dụng môi trường MRS dịch thể, thay thế đường glucose bằng các loại đường sucrose, lactose, sorbitol.
MT6: Môi trường API 50 CHL
Polypeptone: 10g Cao nấm men: 5g Tween 80: 1ml K2HPO4: 2g CH3COONa.3H2O: 5g (NH4)2citrate: 2g MgSO4.7H2O: 0,2g MnSO4.4H2O: 0,05g Bromocresol purple: 0,17g Nước cất đủ 1l. MT 7: Môi trường PBS NaCl: 0,8g Nước cất đủ 1 lít. pH 7,2.
35
3.2 Nội dung nghiên cứu
3.2.1 Sơ đồ nội dung thí nghiệm
3.2.2 Nội dung bố trí thí nghiệm
36
Giai đoạn 1: Phân lập probiotic từ dịch ruột của heo con
Giai đoạn 2: Kiểm tra đặc tính sinh lý, sinh hóa của chủng vi khuẩn phân lập được
37
Giai đoạn 3: Tuyển chọn những chủng có hoạt tính probiotic cao
Giai đoạn 4: Khảo sát giống