- Kết quả giải trình tự ADNr ITS dòng nấm PaeR
3.2.2. điều kiện phát triển thắch hợp của nấm Paecilomyces javanicus
Với ựịnh hướng phát triển chế phẩm, ựề tài ựã tiến hành tìm hiểu tác ựộng của một số yếu tố ựến quá trình phát triển của nấm trong quá trình nhân nuôi, nhằm từng bước có ựược các tư liệu khoa học làm cơ sở cho việc xây dựng qui trình kỹ thuật nhân sinh khối nấm. Kết quả nghiên cứu xác ựịnh các ựiều kiện nuôi cấy nấm P. javanicus ựược trình bầy trong các bảng 3.8, 3.9 và 3.10.
+ Trong số 4 loại môi trường ựược sử dụng ựể nuôi cấy nấm
Paecilomyces javanicus, môi trường PDA là thắch hợp nhất cho nấm phát triển (bảng 3.8); ựường kắnh khuẩn lạc ựạt tới 3,75cm sau 10 ngày nuôi cấy, tiếp ựến là môi trường SDAY với ựường kắnh khuẩn lạc ựạt 3,3cm. Nấm P. javanicus mọc chậm trên môi trường Saboraud và Czapek Ờ Dox, ựường kắnh khuẩn lạc chỉ ựạt tương ứng là 2,35 và 2,53cm.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 58 Bảng 3.8. Khả năng phát triển của nấm tắm xám P. javanicus (PaeR1)
trên các loại môi trường nuôi cấy khác nhau (Viện BVTV, 2011) đường kắnh khuẩn lạc sau các ngày nuôi cấy (cm)
Môi trường
3 ngày 5 ngày 7 ngày 10 ngày
ToC TB
H(%) TB Saboraud 0,56b 1,43d 1,95d 2,35c
PDA 0,72a 1,87a 2,76a 3,75a
SDAY 0,73a 1,70b 2,55b 3,30b
Czapek-Dox 0,71a 1,63c 2,28c 2,53d
CV% 5,73 3,44 3,56 2,8
LSD 0,05 0,036 0,052 0.076 0,078
26,1 77,2
Kết quả theo dõi (bảng 3.8) còn cho thấy, với môi trường PDA, sau 3 ngày nuôi cấy (NNC) thì ựường kắnh khuẩn lạc của nấm chỉ ựạt kắch thước tương tự như nuôi cấy trên môi trường SDAY và Czapek Ờ Dox. Nhưng sau 5 NNC thì ựường kắnh khuẩn lạc ựã tăng lên tới 1,87cm và tới 10 NNC ựã lên tới 3,75cm, trong khi với môi trường SDAY chỉ ựạt 3,3 cm và môi trường Czapek - Dox chỉ ựạt 2,53 cm. điều này có thể do ở giai ựoạn ựầu khi khuẩn lạc với kắch thước nhỏ, hệ sợi ắt nên nhu cầu về các nguồn dinh dưỡng thắch hợp còn chưa cao dẫn ựến ựường kắnh khuẩn lạc gần tương nhau. đến khi khuẩn lạc nấm phát triển lớn lên thì nhu cầu về các nguồn dinh dưỡng thắch hợp (cần nguồn cacbon, vitamin) tăng cao. Hơn nữa môi trường PDA là môi trường có thành phần dịch chiết khoai tây (ựa dạng dinh dưỡng, vitaminẦ) nên ựáp ứng ựược các nhu cầu dinh dưỡng ựể nấm P. javanicus phát triển.
+ Kết quả tìm hiểu khả năng phát triển của nấm P. javanicus ở các ựiều kiện nhiệt ựộ khác nhau trên môi trường PDA (bảng 3.9) cho thấy, nấm phát triển tốt trong khoảng nhiệt ựộ từ 25- 300C với ựường kắnh khuẩn lạc ựạt từ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 59 0,8- 1,04 cm sau 3 NNC, tới 2,61- 2,88cm sau 7 NNC và ựạt tới 5,0 - 5,2 cm sau 12 NNC.
Trong khi ựó, ở nhiệt ựộ 200C ựường kắnh khuẩn lạc chỉ ựạt 0,45 cm sau 3 NNC, 1,98 cm sau 7 NNC và cũng chỉ ựạt 4,0 cm sau 12 NNC. đặc biệt, với nhiệt ựộ là 35oC (liên tục trong tủ ựịnh ôn) thì nấm P. javanicus có biểu hiện không phát triển ựược.
Bảng 3.9. Khả năng phát triển của nấm P. javanicus (PaeR1) ở nhiệt ựộ khác nhau trên môi trường PDA (Viện BVTV, 2011-2012)
đường kắnh khuẩn lạc sau các ngày nuôi cấy (cm) Nhiệt ựộ
3 ngày 5 ngày 7 ngày 9 ngày 12 ngày
20 0C 0,45c 1,21c 1,98c 2,70c 4,00c
25 0C 0,80b 1,79b 2,61b 3,65b 5,00b
30 0C 1,04a 1,93a 2,88a 3,91a 5,20a
350C Không mọc Không mọc Không mọc Không mọc Không mọc
CV% 3,55 5,7 2,9 2.11 2,6
LSD 0,05 0.097 0.088 0.068 0.067 0,11
Trong quá trình theo dõi sự phát triển của nấm P. javanicus ở các ựiều kiện nhiệt ựộ nuôi cấy khác nhau còn nhận thấy, ở khoảng nhiệt ựộ 20-250C khuẩn lạc dầy và bông xốp, bề mặt khuẩn lạc mịn, còn ở nhiệt ựộ 300C thì khuẩn lạc mỏng và bề mặt gồ ghề dạng hạt (hình 3.14). Có hiện tượng này có thể ở nhiệt ựộ 300C nấm hình thành cành bào tử và sinh bào tử sớm hơn sovới các mức nhiệt ựộ khác.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 60 Hình 3.14. Khuẩn lạc nấm Paecilomyces javanicus phát triển ở 2 mức nhiệt
ựộ khác nhau: A: Nhiệt ựộ 250C, B: Nhiệt ựộ 300C
+ Tìm hiểu về ựiều kiện pH môi trường nuôi cấy thắch hợp cho nấm P. javanicus phát triển qua thắ nghiệm tiến hành trên môi trường PDA với 5 mức pH khác nhau, gồm các mức 5,5; 6,0; 6,5; 7,0 và 7,5. Kết quả theo dõi sự phát triển của khuẩn lạc nấm ở các mức pH khác nhau ựược trình bày ở bảng 3.10.
Bảng 3.10. Khả năng phát triển của nấm tắm xám P. javanicus (PaeR1) trong các ựiều kiện pH môi trường khác nhau (Viện BVTV, 2012)
đường kắnh khuẩn lạc sau các ngày nuôi cấy trên môi trường PDA(cm) Công thức pH Môi trường 3 ngày 5 ngày 7 ngày 10 ngày T0C TB H% TB I 5,5 0,62 1,46b 2,18b 3,65c II 6,0 0,77 1,69a 2,52a 4,15a III 6,5 0,75 1,67a 2,44a 4,01b IV 7,0 0,57 1,35c 2,03c 3,53d
V 7,5 0,50 1,27d 1,65d 3,32e
CV% 5,15 4,98 2,71
LSD 0,05 0,069 0,098 0,09
28,1 82,6
Kết quả thắ nghiệm (bảng 3.10) cho thấy nấm P. javanicus có khả năng phát triển ở biên ựộ pH rộng từ 5,5 - 7,5với ựường kắnh khuẩn lạc từ 3,32 -
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 61 4,15 sau 10 ngày nuôi cấy. Trong các mức pH thử nghiệm thì mức pH môi trường từ 6,0 - 6,5 là thắch hợp nhất cho nấm P. javanicus sinh trưởng, ựường kắnh khuẩn lạc sau 10 ngày nuôi cấy có thể ựạt từ 4,01 - 4,15 cm.
Khi pH môi trường là 5,0 và 7,0 thì nấm sinh trưởng chậm hơn, ựường kắnh khuẩn lạc chỉ ựạt tương ứng là 3,53cm và 3,65cm, còn ở mức pH = 7,5 nấm sinh trưởng kém nhất chỉ ựạt 3,32 cm sau 10 NNC.
Hình 3.15. Khuẩn lạc nấm P. javanicus sau 5 ngày nuôi cấy trong các ngưỡng pH môi trường (PDA) khác nhau
Như vậy, qua các thắ nghiệm về ảnh hưởng của chủng loại môi trường, nhiệt ựộ và pH môi trường nuôi cấy ựối với sự phát triển của nấm P. javanicus, nhận thấy nấm phát triển tốt trên môi trường PDA trong khoảng nhiệt ựộ từ 25 - 300C và pH từ 6,0- 6,5. đây là những tư liệu quan trọng ựể phục vụ cho các nghiên cứu chuyên sâu về nấm P. javanicus cũng như ựịnh hướng ựể phát triển sản xuất và ứng dụng chế phẩm nấm này ựể phòng trừ rầy nâu hại lúa.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 62