- Các mẫu nấm ký sinh rầy nâu thu thập trên ựồng ruộng ở một số tỉnh thuộc đồng bằng Bắc Bộ (Hà Nội, Hải Phòng, Vĩnh Phúc)
2.3.2. Nghiên cứu một số ựặc ựiểm sinh học, sinh thái cơ bản của nấm
Paecilomyces javanicus ký sinh trên rầy nâu hại lúa
+ Xác ựịnh ựặc ựiểm hình thái, sinh học của nấm P. javanicus
Nghiên cứu ựặc ựiểm hình thái, sinh học và khả năng sinh sản vô tắnh tạo bào tử trần của nấm theo phương pháp: Nuôi cấy nấm trên môi trường PDA và ựặt trong ựiều kiện của phòng thắ nghiệm, sau ựó tiến hành theo dõi, ựánh giá khả năng phát triển của khuẩn lạc (ựo ựường kắnh khuẩn lạc) và soi
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 35 kắnh xác ựịnh hình dạng, kắch thước của cuống sinh bào tử trần, bào tử trần. Xác ựịnh số lượng bào tử trần trên 1 cm2 khuẩn lạc, sau 3, 5, 7, 10 ngày nuôi cấy bằng phương pháp dùng dao chuyên dụng cắt 1cm2 khuẩn lạc, cân trọng lượng và pha loãng, sau ựó tiến hành ựếm số lượng bào tử trần của phần khuẩn lạc ựó bằng buồng ựếm hồng cầu.
+ Xác ựịnh môi trường thắch hợp ựể nuôi cấy nấm P. javanicus
Thắ nghiệm xác ựịnh môi trường nuôi cấy nấm thắch hợp ựược bố trắ với 4 công thức tương ứng với 4 loại môi trường ựang ựược dùng phổ biến hiện nay:
CT1: Môi trường SABORAUD CT2: Môi trường PDA
CT3: Môi trường SDAY
CT4: Môi trường CZAPEK-DOX
Mỗi công thức 10 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc là 1 ựĩa Petri ựã ựược cấy nấm vào theo phương pháp chấm ựiểm ở tâm ựĩa. đĩa petri ựã cấy nấm ựược ựặt trong ựiều kiện của phòng thắ nghiệm, sau 3, 5, 7 và 10 ngày tiến hành theo dõi, ựánh giá khả năng phát triển của khuẩn lạc (ựo ựường kắnh khuẩn lạc).
+ Xác ựịnh ngưỡng nhiệt ựộ thắch hợp ựể nấm P. javanicus phát triển
Thắ nghiệm xác ựịnh nhiệt ựộ nuôi cấy thắch hợp ựược bố trắ với 4 công thức tương ứng với 4 ngưỡng nhiệt ựộ:
CT1: Nuôi cấy nấm ở 20oC CT2: Nuôi cấy nấm ở 25oC CT3: Nuôi cấy nấm ở 30oC CT4: Nuôi cấy nấm ở 35oC
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 36 Mỗi công thức 10 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc là 1 ựĩa petri ựã ựược cấy nấm vào theo phương pháp chấm ựiểm ở tâm ựĩa. đĩa nuôi cấy nấm ựược ựặt trong tủ ựịnh ôn với các mức nhiệt ựộ tương ứng với các công thức. Sau 3, 5, 7, 9 và 12 ngày tiến hành theo dõi, ựánh giá khả năng phát triển của khuẩn lạc (ựo ựường kắnh khuẩn lạc).
+ Xác ựịnh ựộ pH môi trường thắch hợp ựể nấm P. javanicus phát triển
Thắ nghiệm xác ựịnh ựộ pH môi trường nuôi cấy thắch hợp ựược bố trắ với 5 công thức tương ứng với 5 ngưỡng pH môi trường:
CT1: pH môi trường 5,5 CT2: pH môi trường 6,0 CT3: pH môi trường 6,5 CT4: pH môi trường 7,0 CT5: pH môi trường 7,5
Mỗi công thức 10 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc là 1 ựĩa petri ựã ựược cấy nấm vào theo phương pháp chấm ựiểm ở tâm ựĩa. đĩa nuôi cấy nấm ựược ựặt trong ựiều kiện phòng thắ nghiệm.
ậiÒu chửnh pH môi trường nuôi cấy nấm bỪng cịch cho tõng giảt dung dỡch HCl năng ệé 0,1M hoặc NaOH năng ệé 0,1 M vào môi trường. Sỏ dông pH kạ ệÓ xịc ệỡnh và ựiều chỉnh ệé pH của môi trường ứng với các công thức thắ nghiệm , sau ựó ựặt môi trường ựã chuẩn pH vào nồi hấp khử trùng ở 121 trong 30 phút rồi tiến hành ựổ môi trường ra ựĩa petri. Khi môi trường nguội tiến hành kiểm tra lại ựộ pH của môi trường.
Chỉ tiêu theo dâi: đo ựường kắnh khuẩn lạc của nấm sau 3, 5, 7 và 10 ngàynuôi cấy ở nhiệt ựộ phòng thắ nghiệm.