hãng QIAGEN
- Chuẩn bị
+ Đệm AVL-carrier RNA: cho 310µl đệm AVE vào ống chứa 310 µg lyophilized carrier RNA (dạng đông khô) để thu được dung dịch 1µg/µl, (chia thành các tube nhỏ lưu ở -20o
C, không làm rã đông quá 3 lần nếu lượng mẫu tách chiết < 50 mẫu). Pha đệm AVL và carrier RNA-AVE theo tỷ lệ 100:1 (560 µl AVL và 5,6 µl carrier RNA-AVE).
+ Pha đệm AW1: thêm 25ml ethanol (96-100%) vào 19ml AW1 ban đầu. + Pha đệm AW2: thêm 30ml ethanol (96-100%) vào 13ml AW2 ban đầu. - Tiến hành
Bước 1: Cho 560 µl dung dịch AVL-carrier RNA vào ống eppendorf 1,5ml. Bước 2: Thêm 140 µl huyết thanh vào ống eppendorf trên. Trộn đều (vortex) trong 15 giây.
Bước 3: Ủ ở nhiệt độ phòng 18-25oC trong 10 phút trên giá để mẫu. Bước 4: Ly tâm nhanh.
Bước 5: Thêm 560 µl ethanol (96-100%), trộn đều (vortex) 15 giây. Ly tâm nhanh. Bước 6: Chuyển 630 µl dung dịch trên vào cột QIAamp, đóng nắp và ly tâm 8000 vòng/phút trong 1 phút, giữ lại cột, bỏ ống chứa dịch ở dưới.
Bước 7: Lặp lại bước 6.
Bước 8: Thêm 500 µl dung dịch AW1, đóng nắp và ly tâm 8000 vòng/phút trong 1 phút, giữ lại cột, bỏ ống chứa dịch ở dưới.
Bước 9: Thêm 500 µl dung dịch AW2, đóng nắp và ly tâm 14000 vòng/phút trong 3 phút, giữ lại cột, bỏ ống chứa dịch ở dưới.
33
Bước 11: Chuyển cột QIAamp sang ống eppendorf 1,5ml sạch. Thêm 60 µl đệm AVE, đóng nắp và ủ ở nhiệt độ phòng trong 1 phút rồi ly tâm 8000 vòng/ phút trong 1 phút. Bỏ cột, giữ ống dịch ở phía dưới và lưu ở -20ºC hoặc -70ºC.
