4. Sản phẩm của đề tài
2.1.3. nh tính thành phần hĩa học
2.1.3.1. Hồng kỳ
ðịnh tính
Bản mỏng: Silicagel G dày 0,25mm, hoạt hĩa ở 1100C trong 1 giờ.
a) Pha dung dịch thử:
Lấy 3 gam bột dược liệu, thêm 20ml methanol, đun sơi hồi lưu 1 giờ, để
nguội, lọc. Dịch lọc cho chảy qua một cột sắc ký đã được nhồi 5g ơxyt nhơm trung tính. Phản hấp phụ bằng 100ml methanol 40% , làm bốc hơi dịch lọc trên cách thủy
đến khơ. Cắn được hịa trong 30ml nước rồi được chiết bằng n-butanol đã bảo hịa nước 2 lần, mỗi lần 20ml, loại bỏ nước rửa, bốc hơi dịch chiết n-butanol trên cách thủy đến khơ. Hịa cắn trong 0,5ml methanol, được dung dịch thử.
b) Pha dung dịch đối chiếu
Hịa tan chất Astragalosid IV trong methanol để được dung dịch đối chiếu cĩ nồng độ 1mg/1ml.(Nếu khơng thì lấy 3 gam bột Hồng kỳ chuẩn rồi tiến hành như
pha dung dịch thử)
c) Tiến hành chấm riêng rẽ 2 dịch chiết lên bản mỏng. Sau khi triển khai, lấy ra đểở nhiệt độ phịng. Phun thuốc hiện màu là dung dịch axit sunfuric 10% trong ethanol. Sấy ở 1050C trong 5 phút. So sánh các giá trị Rf của 2 mẫu.
2.1.3.2.Diệp hạ châu
ðịnh tính (DðVN. phụ lục 4.4)
a. Lấy 5 gam dược liệu khơ, tán nhỏ, thêm 50ml ethanol 90%, lắc đều rồi đun cách thủy 30 phút, cơ cạn cịn 3-4ml, chia đơi dịch lọc vào 2 ống nghiệm :
Ống 1: thêm 4-5 giọt axit chlohydric đậm đặc , rồi thêm vào 1 ít bột Zn, xuất hiện màu đỏ.
Ống 2: thêm 2-3 giọt FeCl3, xuấthiện màu xanh tím.
b. Lấy 0,5 gam bột dược liệu, thêm 10ml nước, đun sơi, lọc, lấy 2-3ml dịch lọc để nguội, thêm 1-2 giọt gelatin 2%, xuất hiện vẫn đục.
c. Sắc ký lớp mỏng
Bản mỏng: Silicagel G dày 0,25mm. hoạt hĩa ở 1100C trong 1 giờ.
Dung mơi khai triển: Ethyl acetat – Methanol – Nước – Ammoniac (100:17:13:3)
Tiến hành:
a. Pha dung dịch thử: Làm ẩm khoảng 2 gam bột dược liệu thơ bằng ammoniac đậm đặc, để yên trong 30 phút, thêm 20ml chloroform, ngâm 60 phút
thỉnh thoảng lắc. Lọc rứa cắn với 5ml chlroform, gộp nước rửa và dịch lọc, bốc hơi trên cách thủy tới khơ. Hịa cắn bằng 1ml chloroform, ta thu được dịch thử.
b. Pha dung dịch đối chiếu: dùng 2 gam bột Diệp hạ châu, tiến hành chiết như pha chế dung dịch thử.
c. Chấm sắc ký: Chấm riêng biệt 2 vết của dung dịch thử và dung dịch đối chiếu. Cho vào bình sắc ký. Sấy bản mỏng ở 600C cho biết ammoniac. Phun thuốc thử Dragendorfi Rf của mẫu thử phải giống như mẫu đối chiếu. 2.1.4. Bào chế Chiết xuất Diệp hạ châu Thành phần - Diệp hạ châu 6,5kg - Cồn 40% 39 lít
Chiết xuất theo nguyên tắc chiết xuất ngược dịng, dịch cồn chiết xong được cơ cách thủy cịn 2 lít, lọc lấy dịch trong , thêm nước cho đủ 2 lít (DD1).
Chiết xuất Hồng kỳ
Hồng kỳ 3,5kg nấu cao 3 lần, lần thứ nhất đổ nước ngập mặt dược liệu khoảng 10cm, dùng vỉ gài cho dược liệu khơng nổi lên trên, nấu sơi khoảng 3 giờ, gạn dịch 1, lần thứ hai đổ nước xâm xấp mặt dược liệu đun sơi 2 giờ, gạn lấy dịch 2, lần thứ 3 đổ nước xâm xấp mặt dược liệu đun sơi 1 giờ, gạn lấy dịch 3. Phối hợp dịch 1, 2, 3. Cơ cách thủy cịn 1 lít. Lọc trong, thêm nước cho đủ 1 lít (DD2)
Phối hợp DDl và DD2. Bảo quản bằng natri benzoat 0,4 %
ðĩng ống uống 10ml, tiệt trùng 1100 C trong autoclave.
2.1.5 Yêu cầu chất lượng
Tính chất
Chất lỏng sánh, màu nâu đen, mùi thơm đặc trưng, vịđắng.
ðộ trong và độđồng nhất.
Chất lỏng sánh, đồng nhất, khơng được cĩ váng mốc, bã dược liệu và vật lạ.
Tỷ trọng
Ở nhiệt độ 250 C, đo bằng bình đo tỷ trọng picnomet, tỷ trọng từ 1,0580 đến 1,0590.
Trọng lượng cắn khơ khơng dưới 12,2 % (KL/TT)
Sai số thể tích.
Thể tích : 10ml±10% (10,0-11,0 ml)
ðịnh tính
Phải cĩ phản ứng alkaloidcủa Diệp hạ châu và saponin của Hồng kỳ.
ðộ nhiễm khuẩn Phải đạt mức 4- DðVN III – Phụ lục 10.7. ðĩng gĩi – Bảo quản – hạn dùng ðĩng gĩi : ống uống 10ml, hộp 30 ống Bảo quản : nơi khơ mát Hạn dùng : 24 tháng kể từ ngày sản xuất. 2.1.6. Phương pháp kiểm nghiệm : 2.1.6.1. Tính chất
Kiểm tra bằng cảm quan, chế phẩm phải đạt các tính chất đã nêu.
2.1.6.2. ðộ trong và độđồng nhất
Cho cao thuốc vào ống nghiệm lớn để yên, quan sát bằng mắt thường, dung dịch phải trong và đồng nhất, khơng cĩ váng mốc đĩng cặn.
2.1.6.3. Tỷ trọng
ðo ở nhiệt độ 250 C (Phụ lục 5.15)
Cân chính xác picnomet rỗng, khơ và sạch. ðổ vào picnomet mẫu thử, chú ý khơng để cĩ bọt khí. Dùng giấy lọc thấm hết dung dịch thừa trên vạch mức. Làm khơ mặt ngồi của picnomet, cân và tính trọng lượng mẫu thử chứa trong picnomet. Tiếp sau đĩ dổ mẫu thử ra, rửa sạch picnomet và làm khơ bằng cách tráng ethanol rồi aceton, thổi khơng khí nĩng đuổi hết aceton. Cho nước cất vào picnomet, sau đĩ xác định khối lượng nước cất chứa trong picnomet ở nhiệt độ 250 C. Tỷ số giữa khối lượng mẫu thử và khối lượng nước cất thu được là tỷ trọng mẫu thửở nhiệt độ 250 C.