4. Sản phẩm của đề tài
2.1.6.6.nh tính
Diệp hạ châu
1. Dụng cụ và thuốc thử:
- Bản mỏng tráng sẵn Silica gel 60 F254 đã hoạt hĩa ở 1100 C trong 1 giờ. - Dung dịch mẫu đối chiếu Diệp hạ châu: Lấy 4g bột dược liệu, làm ẩm
bằng dung dịch ammoniac đậm đặc trong 2 giờ. Thêm 20ml cloroform siêu âm 15 phút hoặc ngâm 60 phút. Lọc, rửa cắn với 5ml cloroform. Gộp dịch cloroform, để bay hơi tự nhiên đến cạn, thêm 1 ml cloroform để dược dung dịch chấm sắc ký.
- Dung dịch mẫu: Lấy 20ml cao thuốc, thêm dung dịch ammoniac đậm đặc
đến pH 9, để yên một đêm. Lắng với cloroform, gạn lấy dịch cloroform để
bay hơi tự nhiên đến cạn, thêm 1ml cloroform đểđược dung dịch chấm sắc ký.
- Hệ dung mơi khai triển:
Ethyl acetat – Methanol – Nước – Amoniac (100:11:13:3). - Thuốc thử phát hiện: dung dịch Dragendorff.
2. Cách tiến hành:
- Chấm vạch trên bản mỏng. ðể khơ ở nhiệt độ phịng, cho vào bình sắc ký
đã được bảo hồ dung mơi trước đĩ.
- Sau khi triển khai xong, lấy bản mỏng ra, đểở nhiệt độ phịng cho bay hơi hết dung mơi. Phun thuốc thử Dragendorff, alkaloid cho màu cam với thuốc thử trên.
- Kết quả: Mẫu thử phải cĩ vết cùng màu và Rf tương đương với vết của mẫu đối chiếu Diệp hạ châu.
Hồng kỳ:
1. Dụng cụ và thuốc thử:
- Bản mỏng tráng sẵn Silica gel 60 F254 đã hoạt hĩa ở 1100 C trong 1 giờ. - Dung dịch mẫu đối chiếu Hồng kỳ: Cân 5g Hồng kỳ, chiết nĩng hồi lưu
bằng 20 ml methanol 70% khoảng 1giờ, lắc với n- buthanol, dịch n- buthanol được rửa bằng nước cất. Bốc hơi dịch n - buthanol trên cách thủy
đến khơ, hồ cắn trong 1ml methanol đểđược dung dịch chấm sắc ký. - Dung dịch mẫu thử: Lấy 10ml cao thuốc, chiết bằng n - buthanol, dịch n -
buthanol được rửa bằng nước cất. Bốc hơi dịch n - buthanol trên cách thuỷ
đến khơ, hồ cắn trong 1ml methanol đểđược dung dịch chấm sắc ký. - Hệ dung mơi khai triển: Cloroform – Methanol (9:1)
- Thuốc thử phát hiện: Vanilin 1%/ cồn tuyệt đối/ acid sulfuric 10%/ cồn tuyệt đối (1/1) (cách pha: 1g Vanilin trong 100 ml cồn tuyệt đối [DD1], 10 ml acid sulfuric đậm đặc trong 100 ml cồn tuyệt đối [DD2] . Khi dùng phối hợp đồng lượng DD1 và DD2. Bảo quản DD1 trong tủ lạnh)
2. Cách tiến hành:
- Chấm vạch trên bản mỏng. ðể khơ tự nhiên, cho vào bình sắc ký đã được bảo hồ dung mơi trước đĩ.
- Sau khi triển khai xong, lấy bản mỏng ra, để nhiệt độ phịng cho bay hơi hết dung mơi. Phun thuốc thử Vanilin Sulfuric, sấy bản mỏng ở nhiệt độ
100- 1050C trong 5 phút, các vết saponin cho màu tím với thuốc thử trên. - Kết quả: Mẫu thử phải cĩ vết cùng màu và Rf tương đương với vết của
mẫu đối chiếu Hồng kỳ
2.1.6.7. ðộ nhiễm khuẩn:
Tiến hành cấy vào mơi trường thửđộ nhiễm khuẩn và nấm mốc đã ghi trong DðVN III- phụ lục 10.7. Cao thuốc phải đạt mức 4 theo yêu cầu qui định về độ
nhiễm khuẩn cho các chế phẩm dùng uống
2.2. THỬ NGHIỆM TÁC DỤNG LÂM SÀNG (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Thử nghiệm lâm sàng cĩ đối chứng ngẫu nhiên được tiến hành theo phương pháp mù đơi (double - blind) trên 2 lơ gồm: 44 bệnh nhân uống chế phẩm HK - DHC và 42 bệnh nhân uống chế phẩm DHC. 86 bệnh nhân trên sẽđược uống thuốc liên tục từ 16 tuần đến 104 tuần với liều 30ml mỗi ngày, chia làm 3 lần, mỗi lần 10ml trước khi ăn.
Theo các tài liệu [6],[44],[54] tỷ lệ chuyển đổi huyết thanh HBeAg của các loại Diệp hạ châu là 20%. ðể chế phẩm Hồng kỳ – Diệp hạ châu cĩ tỷ lệ chuyển
đổi huyết thanh hơn lơ chứng (Diệp hạ châu) là 25% (RR = 2,25). ðể 80% khả năng này đúng với độ tin cậy 95%, cỡ mẫu phải đạt: {Z(1- α) √ [2P*(1–P*)] + Z(1– β) √[P1(1–P1)+P2(1-P2)]}2 n = (P1 – P2)2 với P1 = 0,45 Z(1- α) = 1,64 RR = P1 / P2 P2 = 0,2 Z(1– β ) = 0,84 P* = (P1 + P2) / 2 n = 43
Mẫu nghiên cứu được chọn ngẫu nhiên hệ thống, do một người duy nhất thực hiện.
ðể thực hiện “mù đơi”, thuốc nghiên cứu được bào chế cĩ dạng hồn tồn giống nhau (cao nước đựng trong ống thủy tinh 10 ml, toa nhãn giống nhau). Những lơ bào chế và cấp thuốc điều trịđã được qui định ngẫu nhiên từ trước, bệnh nhân và nhân viên y tế (điều dưỡng, bác sỹ điều trị, nhà nghiên cứu khi tính tốn thống kê) dù biết lơ nào là A, lơ nào là B nhưng lại khơng biết lơ nào uống thuốc gì.
2.2.2. Tiêu chuẩn chọn bệnh:
• Bệnh nhân hợp tác
• Tuổi từ 18 – 60
• Cĩ HBsAg (+) trên 6 tháng
• Cĩ ALT ≥ 2 lần trị số bình thường giới hạn cao (≥ 80U/L)
• Anti HCV (-)
• Khơng dùng các dược phẩm hĩa trị cũng như các dược phẩm chiết xuất từ thảo mộc cĩ tác dụng kháng virus hoặc tác dụng điều hịa miễn dịch liên quan đến cơ chế bệnh sinh của bệnh viêm gan B trong vịng 1 tháng cũng như các dược phẩm cĩ tác dụng cải thiện men gan trong vịng 2 tuần trước đĩ.
2.2.3. Tiêu chuẩn lọai trừ:
• Nghiện rượu
• Bệnh nhân điều trị khơng liên tục hoặc tự ý dùng thêm thuốc mà khơng hỏi ý kiến của bác sĩ ..
2.3. PHƯƠNG TIỆN
2.3.1. Chế phẩm nghiên cứu.