4. MỘT SỐ MÔ HÌNH THỬ NGHIỆM TÁC DỤNG AN THẦN GIẢI LO ÂU
2.2.2Khảo sát một số tiêu chuẩn
Độ ẩm
Cân chính xác khoảng 0,5 g cao vào một chén cân (đã sấy ở 105 0C đến khối lƣợng không đổi và đã cân bì), đem sấy ở 105 0C trong tủ sấy dƣới áp suất thƣờng đến khối lƣợng không đổi(nghĩa là chênh lệch giữa 2 lần cân không quá 0,5 mg)
Tính độ ẩm theo công thức: % 100 a b a H Trong đó:
a: khối lƣợng bột cao trƣớc khi sấy (g) b: khối lƣợng bột cao sau khi sấy (g) H%: độ ẩm (kl/kl)
Tro phần
Nung một chén nung bằng sứ cho tới khối lƣợng không đổi, để nguội trong bình hút ẩm và cân khối lƣợng của chén không (b).
Cân chính xác khoảng 2 g cao cho vào chén nung. Trải đều cao ở đáy chén và đốt cẩn thận trên bếp điện cho đến khi cao cháy hoàn toàn và chén không còn bốc khói.
Dùng kẹp sắt dài đƣa chén vào lò nung ở 500-600 0C cho đến khi vô cơ hóa hoàn toàn (tro không còn màu đen). Dùng kẹp sắt lấy chén nung ra, để nguội khoảng 30 phút trong bình hút ẩm. Cân và ghi lại lƣợng cân.
Đặt chén đựng tro vào lò nung và lại tiếp tục nung ở nhiệt độ trên trong 1 giờ nữa. Lấy chén ra, để nguội khoảng 30 phút trong bình hút ẩm. Cân.
Tiếp tục làm nhƣ vậy đến khi kết quả 2 lần cân liên tiếp, khối lƣợng chén có tro (a) chênh lệch không quá 0,5 mg.
Tro toàn phần tính trên cao khô kiệt theo công thức: 100 %
h c c b a A Trong đó:
A%: tro toàn phần (%) của cao a: khối lƣợng chén có tro b: khối lƣợng chén không c: khối lƣợng cao dùng h: độ ẩm (%) của cao
Lấy khoảng 2 g cao, thêm 50 ml ethanol 90 %, lắc đều và đun hồi lƣu cách thủy khoảng 30 phút. Lọc, lấy dịch lọc cho vào 3 ống nghiệm khác nhau để làm phản ứng hóa học.
Ống 1: Lấy 3 ml dịch lọc, thêm vào 3 giọt NaOH 10% dung dịch có màu đỏ cam.
Ống 2: Lấy 3 ml dịch lọc, thêm vào 3 giọt FeCl3 dung dung dịch có màu xanh rêu.
Ống 3: Lấy 3 ml dịch lọc, thêm vào 3 giọt TT chì acetat dung dịch có tủa trắng đục.
:
Kiểm tra sự hiện diện của nguyên liệu Lạc tiên tây trong cao Điều kiện sắc ký:
- Bản mỏng Silicagel 60 F254 (Merck)
- Hệ dung môi khai triển: Toluen - ethyl acetat (5:5)
- - – (7:1:2)
Thuốc thử hiện màu:
Quan sát dƣới ánh sáng thƣờng
Quan sát dƣới đèn tử ngoại ở = 254nm. Quan sát dƣới đèn tử ngoại ở = 366nm.
3 5 105 0C trong 5
phút, quan sát dƣới ánh sáng thƣờng và dƣới đèn tử ngoại ở = 366nm.
2SO4 10 % trong ethanol, quan sát dƣới ánh sáng thƣờng
Thể tích chấm: 20 µl dung dịch thử Tiến hành:
Dung dịch nguyên liệu: Cân 10 g nguyên liệu Lạc tiên tây, chiết hồi lƣu với 100ml
cồn 60 0 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
C lọc. Dịch lọc đƣợc cô đến cắn, hoà với 2 .
Dung dịch cao: Cân chính xác khoảng 0,5 g cao hoà tan trong 20 ml cồn 60 0
C, lọc. Dịch lọc đƣợc cô đến cắn, hoà với 2 ..
Kiểm tra sự hiện diện của vitexin trong cao Điều kiện sắc ký:
- Bản mỏng Silicagel 60 F254 (Merck)
- Hệ dung môi khai triển:
- - (100:17:13)
Ethyl acetat - acid formic - acid acetic – nƣớc (100:11:11:26) Thuốc thử hiện màu:
3 5 105 0C trong 5
phút, quan sát dƣới ánh sáng thƣờng và dƣới đèn tử ngoại ở = 366nm.
Thể tích chấm: 20 µl dung dịch thử Tiến hành:
Dung dịch chuẩn: Cân 2 mg chuẩn vitexin hòa trong 1 ml methanol
ether cho đến khi
.
Định lƣợng flavonoid toàn phần và vitexin trong cao
Định lƣợng flavonoid toàn phần theo phƣơng pháp cân
Cân chính xác 1g cao cho vào bình soxhlet, chiết với 300ml MeOH cho đến khi dịch chiết không còn màu. Dịch MeOH đƣợc cô giảm áp cho đến cắn, hoà cắn với 50ml nƣớc cất. Dịch nƣớc đƣợc lắc với ether (8 lần, mỗi lần 20ml) cho đến khi lớp ete không màu hoặc màu rất nhạt. Gạn bỏ lớp ether, lớp nƣớc đƣợc lắc với EtOAc (12 lần, mỗi lần 20ml). Tập trung dịch chiết EtOAc, cô giảm áp cho đến cắn, làm khô trong tủ sấy chân không đến khối lƣợng không đổi, ta thu đƣợc flavonoid toàn phần. Cân và tính hàm lƣợng flavonoid toàn phần trong cao. Tiến hành định lƣợng 3 lần, lấy giá trị trung bình.
Hàm lƣợng saponin toàn phần đƣợc tính theo công thức:
Với A%: Hàm lƣợng flavonoid toàn phần trên cao khô kiệt
A : Độ ẩm của cao
a : Khối lƣợng flavonoid toàn phần d : Khối lƣợng cao ban đầu.
Định lƣợng flavonoid theo bằng phƣơng pháp quang phổ tử ngoại khả kiến
Mẫu chuẩn: Cân chính xác 5 mg chuẩn vitexin hòa trong 10 ml methanol ta
đƣợc dung dịch có nồng độ 0,5 mg/ml, hút chính xác 500 l dung dịch trên định mức 10 ml bằng methanol ta đƣợc dung dịch chuẩn.
) ( 100 % A d d a A
Mẫu thử: Cân chính xác 1g cao cho vào bình soxhlet, chiết với 300 ml MeOH
cho đến khi dịch chiết không còn màu. Dịch MeOH đƣợc cô giảm áp cho đến cắn, hoà cắn với 50ml nƣớc cất. Dịch nƣớc đƣợc lắc với ether (15 lần, mỗi lần 20ml) cho đến khi lớp ete không màu hoặc màu rất nhạt. Gạn bỏ lớp ether, lớp nƣớc đƣợc lắc với EtOAc (8 lần, mỗi lần 20ml). Tập trung dịch chiết EtOAc, cô đến cắn hòa tan trong MeOH 10ml methanol ta đƣơc dung dịch A, dùng micropipette hút chính xác 20 l dung dịch A định mức 10µl bằng methanol.
Mẫu trắng: methanol
Tiến hành đo độ hấp thu các mẫu ở đỉnh hấp thu cực đại max = trên máy UV – Visible Spectrophotometre
Lƣợng flavonoid tính theo vitexin có trong cao đƣợc tính theo công thức: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
m n d C A A X c c t 4 10 Trong đó: At : Độ hấp thu mẫu thử Ac : Độ hấp thu mẫu chuẩn Cc : Nồng độ chất chuẩn (µg/ml)
d : Độ tinh khiết của chất chuẩn (95%)
m : Khối lƣợng cao cần định lƣợng đã trừ ẩm (g) n : độ pha loãng