2. Phương pháp tiến hành
2.2. Khảo sát khả năng tăng trưởng của các chủng nấm men trên giá đỡ
giá đỡ BC
2.2.1. Xác định mật độ tế bào ban đầu của các chủng nấm men
Mục đích :
Điều chỉnh mật độ tế bào ban đầu của các chủng nấm men sao cho tương đối bằng nhau để so sánh khả năng tăng trưởng của chúng.
Các bước thực hiện :
Lấy một lượng sinh khối các chủng nấm men tương đối đều nhau (một vịng que cấy) hoạt hĩa trong ống nghiệm chứa 5ml mơi trường Hansen lỏng. Ủ ở nhiệt độ phịng trong 24 giờ.
Sau đĩ tiến hành đếm mật độ tế bào bằng buồng đếm hồng cầu. Nếu mật độ tế bào ban đầu của các chủng nấm men khơng bằng nhau thì chỉnh lại bằng cách pha lỗng với mơi trường Hansen lỏng. Sau đĩ kiểm tra lại mật độ tế bào sống bằng cách đếm khuẩn lạc.
2.2.2. Khảo sát tỉ lệ phối hợp giữa khối lượng BC với thể tích mơi trường (MT) rỉ đường thích hợp cho sự tăng trưởng của các chủng nấm men
Mục đích :
- Khảo sát độ ẩm của giá đỡ phù hợp cho sự tăng trưởng của nấm men.
Các bước thực hiện:
- BC sau khi lấy ra khỏi mơi trường lên men được ngâm và thay nước liên tục trong 3 ngày (4 giờ một lần).
- Cân để xác định khối lượng của các miếng BC. - Sấy miếng BC đến cịn 50% khối lượng.
- Thu các miếng BC cĩ khối lượng khoảng 80g (cĩ bề dày phù hợp để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo).
SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 41
- Chuẩn bị mơi trường rỉ đường [MT2] cĩ nồng độ 2X.
- Tùy vào từng tỷ lệ kết hợp, ta sẽ bổ sung mơi trường rỉ đường nồng độ 2X với các thể tích khác nhau (được biểu diễn trong bảng 3) để sau khi kết hợp với BC thì tất cả các mơi trường đều cĩ nồng độ 1X nhưng cĩ độ ẩm khác nhau.
Bảng 3.1: Tỷ lệ phối hợp giữa khối lượng BC với thể tích MT rỉ đường
- Sau khi bổ sung mơi trường, cho miếng BC vào và đem hấp khử trùng ở 121°C trong 20 phút.
- BC sau hấp khử trùng vẫn được ngâm trong mơi trường khoảng 24 giờ để trương nở hồn tồn.
- Sau 24 giờ, đặt mỗi miếng BC đã trương nở vào hộp nhựa. - Cấy 10% giống nấm men đã điều chỉnh mật độ trong mơi trường Hansen lỏng lên bề mặt miếng BC chứa mơi trường rỉ đường.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Sau 3, 4, 5, 6, 7 ngày, tiến hành thu sinh khối trên BC đối với mỗi nghiệm thức, sấy khơ sinh khối đến khối lượng khơng đổi.
Đối chứng (trong mơi trường rỉ đường lỏng cĩ sục khí):
Các bước thực hiện
- Pha mơi trường rỉ đường [MT2] cĩ nồng độ 1X, phối vào các bình thủy tinh với các thể tích như các nghiệm thức ở bảng 4 và hấp khử trùng ở 121°C trong 15 phút.
Mơi trường rỉ đường Nghiệm thức Tỷ lệ phối hợp Khối lượng BC (g) V 2X (ml) V H2O(ml) Nồng độ sau 1 1:2 80 120 40 1X 2 1:2,5 80 140 60 1X 3 1:3 80 160 80 1X
SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 42
Bảng 3.2: Thể tích MT rỉ đường sục khí
- Pha 1000ml nước muối NaCl 10% trong một bình thủy tinh dung tích 2000ml.
- Cấy 10% giống nấm men đã điều chỉnh mật độ trong mơi trường Hansen lỏng vào các bình chứa mơi trường rỉ đường.
Chỉ tiêu theo dõi
- Sau 3, 4, 5, 6, 7 ngày tiến hành thu dịch lỏng rồi ly tâm để thu sinh khối nấm men đối với mỗi nghiệm thức, sấy khơ sinh khối đến khối lượng khơng đổi.