2. Phương pháp tiến hành
2.1. Nhân giống A.xylinum để thu cellulose vi khuẩn (BC)
Mục đích: tạo miếng BC để làm giá đỡ nuơi cấy vi sinh vật.
Các bước thực hiện:
Thu BC
Nhân giống cấp 2 Nhân giống cấp 1
Lên men tĩnh 4 ngày Cấy giống
Tỉ lệ V giống : V(MT5)= 1: 10
Nhân giống cấp 3 Giống từ mơi trường
giữ giống
Xử lý BC Nước dừa già
Lọc + bổ sung hĩa chất
Đun sơi 15 phút
Bổ sung acid acetic đậm đặc Để nguội đến nhiệt
độ phịng
Phối ra hộp nhựa
Cấy vào 5ml mơi trường hoạt hĩa [MT4] trong 24 giờ
Hút 10ml giống cấp 1 vào bình 100ml mơi trường [MT4] để 24 giờ
Hút 20ml giống cấp 2 vào bình 200ml mơi trường [MT4] để 24 giờ
SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 39
Phương pháp xử lý BC tươi sau khi thu hoạch
Mục đích: BC sau khi xử lý được sử dụng làm giá đỡ nuơi cấy tế bào vi sinh vật.
Yêu cầu: BC tươi thu được sau lên men cĩ độ ngậm nước khá cao. Trong BC chứa một lượng lớn mơi trường lên men và các sản phẩm của quá trình trao đổi chất (acid acetic, …), do đĩ xử lý BC phải đạt các yêu cầu sau:
- Cĩ tính chất cơ lý bền vững, ổn định để chịu được các tác động của mơi trường như khuấy trộn, các áp lực …
- Sạch và cĩ thể khử trùng. - Loại bỏ hồn tồn các tạp chất.
Phương pháp:
- Phương pháp 1: đun BC với NaOH 3% ở 100°C trong 30 phút. Trung hịa bằng HCl 5%.
- Phương pháp 2: ngâm BC với NaOH 3% trong 12 giờ. Trung hịa bằng HCl 5%.
- Phương pháp 3: BC thơ thu được sau lên men cĩ độ ẩm 90% - 92%
Ngâm nước: thời gian 24 giờ, thay nước 4 lần → vắt lần 1: thời gian 10 phút, tốc độ vắt 100 – 200vịng/phút, ẩm độ sau khi vắt 50 – 55% → ngâm nước cho trương nở trở lại: thời gian 24 giờ, thay nước 4 lần → vắt lần 2: thời gian 10 phút, tốc độ vắt 100 – 200vịng/phút, ẩm độ sau khi vắt 50 – 55%.
Sấy: nhiệt độ 40°C trong 10 giờ, độ ẩm sau khi sấy là 12 – 15%.
Khử trùng: ở nhiệt độ 121°C trong 15 – 20 phút.
- Phương pháp 4: ngâm với NaOH 3% trong 2 giờ. Trung hịa bằng HCl 5%. Lặp lại phương pháp 3.
SVTH: Lê Thanh Quỳnh Trang 40
Lựa chọn phương pháp xử lý BC thích hợp, sau đĩ sấy miếng BC cho ráo bớt nước, cân trọng lượng sau khi sấy và hấp khử trùng ở 121°C, 1atm trong 15 phút.