- Chuẩn bị mẫu
Ðồng nhất khoảng 200 g mẫu thủy sản bằng máy nghiền đồng thể
Cân 25 g mẫu đã xay nghiền đưa vào bình tam giác dung tích 50 ml. Thêm 25 ml nước cất rồi khuấy trộn đều bằng đũa thuỷ tinh. Sau đó, đậy miệng bình bằng mặt kính đồng hồ.
Ðun từ từ bình tam giác trên bếp điện cho đến sôi. Chú ý, khi đun phải lắc đều. Làm nguội mẫu rồi dùng giấy lọc Whatman để lọc lấy dịch trong.
- Tiến hành: Nhỏ 5 - 6 giọt dịch mẫu vào trong ống nghiệm chứa 5 ml dung dịch thuốc thử urê
Ðun nóng dung dịch trong 1 phút.
Quan sát màu dung dịch. Tiến hành đọc kết quả.
đ. Ðọc kết quả: Kết luận mẫu có urê nếu màu dung dịch trong ống nghiệm chuyển sang màu vàng chanh đậm. Nồng độ của urê trong mẫu càng cao thì màu vàng của dung dịch càng đậm.
4.2. Phát hiện nhanh urê bằng urease
(Giới hạn phát hiện 0,01%)
a. Nguyên lý: Làm bay hơi hết NH3 có trong mẫu, dùng urease thủy phân ure
trong mẫu, sau đó tiến hành phát hiện NH3 tạo thành bằng giấy đo pH. Phản ứng xảy ra như sau:
CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2 b. Dụng cụ, hóa chất: - NaOH 1N - Phenolphtalein 1% - Urease thô - Giấy đo pH - Máy ly tâm - Cốc thủy tinh 100ml, 250ml - Bể điều nhiệt - Bếp điện c. Tiến hành:
- Nghiền nhỏ 10gam thịt cá, thêm vào 10ml nước cất trung tính, khuấy đều, ly tâm lấy phần dung dịch vào cốc thủy tinh 100ml, thêm vào đó vài giọt phenolphtalein 1%, tiếp theo cho từ từ dung dịch NaOH 1N cho đến khi dung dịch trong cốc chuyển sang màu hồng (dư NaOH), chú ý khi cho NaOH vào phải khuấy đều dung dịch.
- Sau đó đem cốc đun nhẹ trên bếp đến cạn để đuổi hết NH3 có sẵn trong mẫu. Để nguội cốc, hòa tan cặn bằng 20ml nước cất ta được dung dịch chứa urea.
- Cho thêm 0,5gam bột đậu tương, đặt cốc vào bể điều nhiệt có nhiệt độ ổn định là 450C trong 5 phút để thủy phân urea.
- Sau 5 phút thủy phân, tiếp tục đun nóng dung dịch trong cốc, dùng giấy pH đã tẩm nước cất trung tính đặt lên miệng cốc để quan sát và nhận xét.
d. Đọc kết quả:
PHỤ LỤC