Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1.2. Kết quả tinh chế kháng nguyên HA bằng li tâm siêu tốc trên gradient saccaroza
saccaroza
Bước ñầu tiên của quá trình tinh chế là cô ñặc virus bằng li tâm siêu tốc với tốc ñộ 30000v/p trong 2 giờ. Cặn virus thu ñược ñem hòa lại trong dung dịch PBS 1X. Sau li tâm siêu tốc cho hiệu giá virus là 10240 HAU.
Sau khi thu dịch niệu chứa virus cô ñặc bằng li tâm siêu tốc, tinh chế
bằng li tâm phân vùng trong thang phân vùng Saccaroza 60%, 30% và 15% chúng tôi thu ñược 2 băng, băng 1 nằm trong vùng Saccaroza 15%, băng 2 nằm trong vùng Saccaroza 30%.
Hình 3.2. Hai dải băng virus xuất hiện sau khi li tâm phân vùng
Saccaroza 15 % Saccaroza 30% Saccaroza 60% 60%60% Băng 1 Băng 2
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 38 Dịch virus thu ñược ở dải băng thứ nhất nằm trong vùng Saccaroza 15% chủ yếu là các hạt virus không nguyên vẹn và các mảnh vỡ trong quá trình tinh chế vì ñây là vùng ñường có tỉ trọng nhỏ, dải băng thứ 2 nằm trong vùng Saccaroza 30% chứa hầu hết các hạt virus còn nguyên vẹn vì ñây là vùng ñường có tỉ trọng cao hơn.
Cả hai loại kháng nguyên này ñều ñược sử dụng cho các mục ñích khác nhau. Kháng nguyên tinh chế của dải băng 1 ñược sử dụng làm kháng nguyên gắn bản trong kỹ thuật ELISA ñể phát hiện kháng thể, còn kháng nguyên tinh chế từ dải băng thứ 2 với các hạt virus tinh chế không bị vỡ ñược dùng ñể hấp phụ bào tử Bacillus subtilis PY79 bất hoạt sản xuất chế phẩm gây miễn dịch.