Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.5.Phản ứng ngưng kết hồng cầu (kiểm tra hiệu giá HA)
Chuẩn bị hồng cầu gà:
- Lấy 2 ml máu gà trống tơ khỏe mạnh từ ven cánh vào trong bơm tiêm
ñã chứa sẵn 2ml dung dịch chống ñông Alserver.
- Chuyển sang ống li tâm ñã chứa sẵn 4 ml dung dịch Alserver. Li tâm 1500 v/p trong 5 phút.
- Rửa hồng cầu bằng PBS 1X. - Li tâm 1700 v/p trong 10 phút.
- Hút nhẹ nhàng ñể loại bỏ PBS và pha hồng cầu thành dung dịch hồng cầu 0,5 % trong PBS 1X.
Làm phản ứng trên phiến nhựa vi lượng 96 giếng hình chữ U:
- Dùng pipet 12 kênh, cho 90 µl dung dịch PBS 1X vào hàng ñầu tiên (hàng A) của phiến nhựa và 50 µl vào tất cả các giếng còn lại.
- Bổ sung tiếp 10 µl dịch niệu thu từ trứng ñã cấy virus vào 11 giếng hàng trên cùng theo các vị trí tương ứng lần lượt từ A1 ñến A11 và 10 µl dung dịch PBS 1X vào giếng A12.
- Pha loãng dịch virus theo bậc hai từ hàng A ñến hàng H: + Vặn pipet 12 kênh ở thể tích 50 µl. + Dùng pipet hút lên ñẩy xuống 3 lần bắt ñầu ở hàng A. + Hút lên 50 µl hỗn dịch từ hàng A chuyển xuống hàng B. + Làm tương tự từ hàng B ñến hàng H. Tại hàng cuối cùng hút bỏ 50µl hỗn dịch. - Bổ sung 50 µl hồng cầu gà 0,5% theo thứ tự các cột từ 1 ñến 12 của phiến nhựa.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 30 - Lắc nhẹ, ñể tĩnh ở nhiệt ñộ phòng trong khoảng 30 phút và ñọc kết quả: Cột 12 (A12 ñến H12) là chứng hồng cầu, hồng cầu phải lắng hoàn toàn. Hiệu giá HA là ñộ pha loãng cao nhất vẫn gây ngưng kết hồng cầu.