Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.3.Tiêm trứng
Chủng virus ñược sử dụng ñể tiêm vào trứng là chủng NIBRG-14 của NIBSC Vương Quốc Anh. Chủng này ñược Viện Công nghệ Sinh học nhận về vào ngày 13/11/2005 theo MTA ñã ký kết với NIBSC.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 28 - Sau 10 ngày ấp trứng, tiến hành soi lại trứng ñể ñảm bảo trứng ñược tiêm là hoàn toàn khỏe mạnh bình thường, loại ñi những quả có hiện tượng thối hỏng.
- Dùng bút chì ñánh dấu túi hơi và ñầu phôi trứng. - Dùng khăn tẩm cồn 70% lau lại trứng một lần nữa. Pha virus:
Giống virus: Nước trứng chứa virus vacxin giống gốc có hiệu giá HAU > 1/640 bảo quản ở -70oC. Sau khi lấy khỏi tủ lạnh sâu (-70oC) ñể ống gốc trong ñá cho tan tiến hành pha giống.
+ Pha loãng virus trong PBS 0,01M (pH = 7,2) vô trùng chứa 100 µg gentamycin/ml ở ñộ 10-3 ñểñạt 1000 liều EID50.
Dung dịch pha virus luôn ñược giữ trên ñá. Tiến hành tiêm virus vào trứng:
+ Dùng cồn Iốt 0,5% sát trùng vị trí tiêm là túi hơi, ñầu phôi.
+ Khử trùng dùi ñục trứng trên ngọn lửa ñèn cồn, ñục hai vị trí ñã sát trùng bằng cồn iốt, 1 ở túi hơi, 1 ởñầu phôi.
+ Dùng bơm tiêm vô trùng tiêm dịch virus ñã pha loãng vào vị trí ñầu phôi của trứng, mỗi quả 200 µl dịch virus ñã pha loãng.
+ Sau khi tiêm dùng cồn iốt sát trùng lại viết tiêm. + Hàn kín vết tiêm bằng paraphin nấu chảy.
+ ðưa trứng sang tủ ấm 33,5 °C. Ấp tiếp trong vòng 3 ngày (72 giờ). Sau 24 giờ soi trứng kiểm tra và loại bỏ những trứng bị chết phôi.