Đường chuẩn acid galic xác định hàm lượng TPC
Nguyên tắc: Trong thành phần thuốc thử Folin-Ciocalteu có phức hợp molibden- tungsten. Phức hợp này sẽ bị khử bởi các hợp chất phenolic tạo thành sản phẩm phản ứng có màu xanh dương, hấp thụ cực đại ở bước sóng 765 nm. Hàm lượng polyphenol có trong mẫu tỉ lệ thuận với cường độ màu.
Tiến hành:
- Pha dãy dung dịch acid gallic chuẩn 0-0,5mg/ml và các hóa chất khác theo bảng 3.1. Tiến hành đo độ hấp phụ ở bước sóng 765 nm trên máy quang phổ UV-VIS Heliox α. Thí nghiệm được lập lại 2 lần lấy kết quả trung bình và vẽ đồ thị tương quan giữa nồng độ acid gallic và độ hập thu A
Bảng 3.1: Xây dựng đường chuẩn acid gallic
Mẫu Hóa chất 1 2 3 4 5 6 7 NĐ A.gallic (mg/ml) 0 0,1 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 A.gallic 0,5 mg/ml (μl) 0 20 40 50 60 80 100 Nước cất (μl) 100 80 60 50 40 20 0 TT Folin 1N (μl) 400 400 400 400 400 400 400 Na2CO3 7,5%(ml) 1 1 1 1 1 1 1 Nước cất (ml) 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5 3,5
Cách tính kết quả: Dựa đồ thị biểu hiện sự tuyến tính giữa nồng độ acid gallic và độ hấp phụ A: A = Cx + y (với x, y là hệ số biểu hiện trên đồ thị).
Cách xác định hàm lượng polyphenol trong mẫu phân tích
Sử dụng phương pháp Folin-Ciocalteu. [25]
định trong vòng 5 phút, thêm vào 1ml dung dịch Na2CO3 7,5%, cuối cùng thêm nước cất vào hỗn hợp để đạt được thể tích 5ml. Để ổn định ở nhiệt độ phòng trong vòng 2 giờ. Tiến hành đo mẫu bằng máy đo quang phổ ở bước sóng 765nm.
Cách tính hàm lượng polyphenol
Hàm lượng TPC = (C*V*a)/m Trong đó:
TPC (mg GAE/g gạo): Hàm lượng TPC.
C (mg/ml): Dựa vào đường chuẩn acid gallic. A = Cx + y V (ml): Thể tích DMSO hòa tan cắn.
a: Hệ số pha loãng.
m (g): Khối lượng bột gạo đem chiết.
Đường chuẩn quercitin xác định hàm lượng TFC.
Nguyên tắc: Các hợp chất flavonoid tổng số có thể tạo phức màu với AlCl3 trong methanol được hấp thụ ở bước sóng 415 nm.
Tiến hành:
- Pha dãy dung dịch quercetin chuẩn 0-45 μg/ml. Cho lần lượt các hóa chất vào ống nghiệm theo bảng 3.2. Tiến hành đo độ hấp phụ ở bước sóng 415 nm trên máy quang phổ UV-Vis Heliox α. Thí nghiệm được lập lại 2 lần để lấy kết quả trung bình và vẽ đồ thị tương quan giữa nồng độ quercetin và độ hập thu A.
Bảng 3.2 : Xây dựng đường chuẩn quercetin
NĐ Quercetin (μg/ml) 0 5 15 25 35 45 TT Quercetin (μl) 0 50 150 250 350 450 MeOH (μl) 1000 950 850 750 650 550 AlCl3/MeOH (μl) 1000 1000 1000 1000 1000 1000
Cách xác định hàm lượng flavonoid trong mẫu phân tích [9]
Dịch chiết đem cô quay cho bay hết dung môi, hòa tan mẫu thu được trong DMSO. Hút 1000μl dịch chiết, thêm vào 1000 μl dung dịch MeOH/AlCl3 2% để ổn định khoảng 10 phút trong bóng tối. Sau đó, tiến hành đem đo quang ở bước sóng 415 nm, xác định độ hấp thu của mẫu.
Cách tính hàm lượng TFC:
Hàm lượng TFC = (C*V*a)/m Trong đó:
C (mg/ml): Dựa vào đường chuẩn quercetin. A = Cx + V (ml): Thể tích DMSO hòa tan cắn
a: Hệ số pha loãng
m (g): Khối lượng bột gạo đem chiết