Có nhiều phƣơng pháp định tính Thiamphenicol và Enrofloxacin nhƣ phƣơng pháp hóa học, phƣơng pháp HPLC (dựa vào thời gian lƣu của chúng trong cột sắc ký), phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng (Think Layer Chromatography - TLC) Ở nội dung đề tài này chỉ giới thiệu phƣơng pháp định tính bằng sắc ký lớp mỏng
Sắc ký lớp mỏng dựa chủ yếu vào hiện tƣợng hấp thu trong đó pha động là một dung môi hoặc một hỗn hợp dung môi di chuyển ngang qua một pha tĩnh là một chất háp thu trơ nhƣ silica gel hoặc oxid alumin Pha tĩnh này đƣợc trang thành một lớp mỏng đều, phủ lên một nền phẳng nhƣ tấp kiếng, tấm nhơm hoặc tấm plastic
Hình 3.2 Bình sắc ký lớp mỏng
Bình sắc ký bằng thủy tinh có nắp đậy
Pha tĩnh: Một lớp mỏng khoảng 0 25mm của một loại chất hấp thu nhƣ silica gel, alumin,… đƣợc tráng thành một lớp mỏng đều phủ lên một nền phẳng nhƣ tấm
Pha động (dung mơi) Tấm nền mỏng Bình sắc ký Nắp đậy Pha tĩnh (chất hấp thu) Mẫu cần phân tích
SVTH Nguyễn Minh Điện 26 kiếng, tấm nhôm hoặc tấm plastic Chất hấp thu trên tấm giá đỡ nhờ sulfat calci khan, hoặc tinh bột, hoặc một loại polymer hữu cơ
Mẫu cần phân tích: thƣờng là hỗn hợp nhiều chất có độ phân cực khác nhau, sử dụng vi quản chấm mẫu thành một điểm gọn trên pha tĩnh, ở phía trên cao hơn một chút so với mặt thoáng của chất lỏng (pha động) đang chứa trong bình sắc ký
Pha động: một dung môi hoặc hỗn hợp dung môi di chuyển dọc theo tấm lớp mỏng và lôi kéo mẫu chất đi theo nó Dung mơi di chuyển nhờ vào tính mao quản Mỗi thành phần của chất mẫu sẽ di chuyển với với mỗi vận tốc khác nhau, đi phía sau mực của dung mơi Vận tốc di chuyển này tùy thuộc vào các lực tƣơng tác tĩnh điện giữa pha tĩnh và các thành phần của mẫu chất (hiện tƣợng hấp thu của pha tĩnh) và tùy vào độ tan của mẫu chất trong dung môi
Phƣơng pháp tiến hành
Dùng ống mao quản chấm lần lƣợt các điểm của dung dịch chuẩn đối chứng và dung dịch mẫu cần phân tích lên bản sắc ký Với mỗi điểm, chấm nhiều lần nhƣng giữ cho vết chấm không lan rộng Sau khi chấm hồn tất, tiến hành làm khơ để dung môi bay đi khỏi vết chấm rồi nhúng bản vào dung dịch giải ly, đậy nắp bình sắc ký lại
Khi dung mơi di chuyển lên tới mức tiền tuyến thì lấy bản sắc ký ra khỏi bình giải ly, sau đó làm khơ bản rồi tiến hành quan sát các vết của mẫu dƣới đèn tia tử ngoại (UV) Đo vị trí các vết và vị trí mực dung mơi di chuyển đƣợc rồi tính giá trị Rf của
từng vết So sánh Rf của vết bên dung dịch chuẩn và vết bên dung dịch mẫu để xác
định xem trong mẫu có chứa chất cần phân tích hay khơng
Hình 3.3 Mơ hình chấm sắc ký
Đoạn đƣờng di chuyển của chất phân tích Đoạn đƣờng di chuyển của pha động Rf = =
a b
Tiền tuyến dung môi
Mức xuất phát a
Ƣu điểm của sắc ký lớp mỏng: chỉ cần một lƣợng rất ít mẫu để phân tích, có thể phân tích đồng thời mẫu và chất chuẩn đối chứng trong cùng điều kiện phân tích Tất cả các hợp chất trong mẫu phân tích có thể đƣợc định vị trên tấm sắc lớp mỏng