3.1 Dựng đƣờng chuẩn [9]
Đƣờng chuẩn thể hiện cho tính tuyến tính của quy trình phân tích Tính tuyến tính của quy trình phân tích là khả năng luận ra các kết quả của phƣơng pháp dựa vào đƣờng biểu diễn sự phụ thuộc giữa độ đáp ứng (response) của đại lƣợng đo đƣợc (y) và nồng độ (concentration) là một một đƣờng thẳng (x)
y = ax + b
Đại lƣợng đặc trƣng cho tính tuyến tính là hệ số tƣơng quan R (coefficient of
correlation) Thƣờng chấp nhận sự tuyến tính khi 0 95 ≤ R2 ≤ 1
3.2 Hiệu suất thu hồi
Hiệu suất thu hồi là % hàm lƣợng chất phân tích đo đƣợc sau một hay nhiều giai đoạn thực hiện của phƣơng pháp phân tích so với hàm lƣợng chất phân tích thực ban đầu
Hiệu suất thu hồi nằm trong khoảng 80 – 100%, quy trình lý tƣởng thì hiệu suất đạt 95% Đối với các mẫu phức tạp hiệu suất thu hồi có thể đạt từ 70 – 75%.
Cách đo hiệu suất thu hồi bằng phƣơng pháp thêm chuẩn:
Mẫu trắng khơng chứa chất phân tích có nền mẫu giống nhƣ mẫu muốn đo
Mẫu phân tích có chứa chất phân tích: tiến hành quy trình phân tích để xác định
lƣợng chất phân tích ban đầu có trong mẫu ký hiệu CM
Thêm vào một lƣợng chất phân tích có nồng độ xác định (CC) vào mẫu cần phân tích, thực hiện quy trình phân tích để xác định lƣợng chất phân tích (CMC) đã thêm vào mẫu và tính hiệu suất thu hồi theo cơng thức:
Trong đó: CB – nồng độ chất phân tích có trong mẫu trắng (bị nhiễm mẫu)
CM – nồng độ chất tích có trong mẫu phân tích
CC – nồng độ chất chuẩn thêm vào mẫu phân tích
CMC – nồng độ chất tích có trong mẫu phân tích đã đƣợc thêm chuẩn
CMC – CM – CB CC
SVTH Nguyễn Minh Điện 28
3.3 Xác định RSD, LOD, LOQ [9]
RSD ( Relactive Standard Deviation): Độ lệch chuẩn tƣơng đối (%) là đại lƣợng đặc trƣng cho độ chính xác của phƣơng pháp phân tích, cho biết mức độ phân tán của các phép thử song song khi áp dụng phƣơng pháp đề xuất cho cùng một mẫu thử đồng nhất trong cùng điều kiện xác định
LOD (limit of detection) là cực tiểu phát hiện đƣợc của phƣơng pháp phân tích, đó là nồng độ tối thiểu của một chất trong một nền mẫu nhất định mà thiết bị có thể phát hiện đƣợc
LOQ (limit of quantitation) là cực tiểu đo đƣợc của phƣơng pháp, đó là nồng độ tối thiểu của một chất trong một nền mẫu xác định mà thiết bị có thể đo đúng đƣợc với một RSD% quy định
Giới hạn phát hiện, giới hạn định lƣợng đƣợc xác định dựa vào đƣờng chuẩn, trong quá trình xây dựng dƣờng chuẩn, ứng với từng nồng độ pha chuẩn Ci ta đo đƣợc diện tích peak tƣơng ứng Si.
Xác định hệ số hiệu chỉnh tuyến tính theo cơng thức: ΔCSi= Si
Ci
Xác định hệ số hiệu chỉnh tuyến tính trung bình
i C S + + C S + C S = i i ... ΔCS 2 2 1 1
Xác định độ lệch chuẩn SD theo công thức
1 ΔCS ΔCS SD 2 i ) ( = i
Xác định độ lệch chuẩn tƣơng đối RSD theo cơng thức 100
ΔCS SD %
RSD( )=
Trong đó: ∆CSi - là hệ số hiệu chỉnh tuyến tính ở từng nồng độ chuẩn
Ci – Nồng độ chuẩn pha
Si – Diện tích peak tƣơng ứng của từng chuẩn
i – Số lần đo
Tiêu chuẩn chấp thuận cho độ chính xác phụ thuộc nhiều vào loại chất phân tích Đối với phân tích các mẫu sinh học, độ chính xác khoảng 15% ở giới hạn nồng độ định lƣợng Đối với mẫu thực phẩm và mẫu mơi trƣờng, độ chính xác tùy thuộc rất nhiều vào mẫu phân tích, nồng độ chất phân tích và kỹ thuật phân tích Trong các trƣờng hợp này, RSD(%) có thể thay đổi từ 2% đến khoảng 20% (theo hiệp hội hóa học quốc tế AOAC) hay FDA (Cơ quan Quản lý thuốc và thực phẩm Mỹ - Food and Drug Administration) phân tích thuốc trong dịch sinh học là 15 – 20%.
Xác định giới hạn phát hiện LOD theo công thức b SD = LOD 3 10
Xác định giới hạn định lƣợng LOQ theo cơng thức
b SD =
LOQ 10 Trong đó: SD - Độ lệch chuẩn
PHẦN 2
CHƢƠNG IV THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ