TP (%) DM OM CP EE NFE CF NDF
Cỏ mồm 22,0 91,2 9,65 4,44 69,5 23,6 69,5
DM: vật chất khô, CP: đạm thô, EE: chất béo, NDF: xơ trung tính, NFE: chiết chất khơng đạm, CF: xơ thô. Nguồn : Phạm Lê Tám (2007).
j Cây anh đào giả [8] [13] [14] [20]
Tên khoa học: Gliricida sepium. Theo Devendrac (1997) ngọn lá của cây anh đào giả
có thể thay thế nguồn thức ăn protein thương mại đắt tiền mà khơng có bất kỳ ảnh hưởng nào đến việc thu nhận thức ăn và năng suất sữa của gia súc ăn cỏ. Sự hạn chế của cây anh đào giả: cây anh đào giả có chứa các chất độc và chất kháng dinh dưỡng như chất coumarin (Đỗ Huy Bích và et al., (2004)) tannin, canavanin và những dẫn xuất họ hàng khác với nó (Nguyễn Thị Hồng Nhân (2005)). Anh đào giả có khả năng cải tạo đất rất mạnh, ngoài khả năng cố định đạm tự do của bộ rễ, lá và hoa khi rụng cũng làm tăng nguồn đạm đáng kể cho đất. Không những thế, những nơi có thảm cỏ tranh phát triển mạnh, khó diệt trừ, người ta dùng cây anh đào giả để trồng thành rừng một thời gian sẽ diệt được và biến đất cỏ tranh thành đất canh tác nông nghiệp. Gỗ của anh đào giả có thớ mịn, vân khá đẹp và bền, thường được dùng làm đồ trang trí nội thất, làm nông cụ, làm tà vẹt đường tàu và làm gỗ xây dựng… Anh đào giả có nguồn gốc ở vùng nhiệt đới châu Mỹ, được trồng phổ biến ở các nước nhiệt đới châu Á làm cây cảnh quan trong các công viên, vườn hoa, biệt thự và làm cây che bóng cho các
cây cơng nghiệp. Cây thích điều kiện nóng ẩm, nhiệt độ khơng khí 20–30oC, độ chua
đất 5-6,2. Trong điều kiện thích hợp cây thường có chiều cao từ 4-7m, cành nhánh khá nhiều, mọc chếch, mang những lá kép lông chim lẻ, với 9-15 lá chét hình xoan hơi thuôn màu xanh sáng, dài 4-5cm, rộng 1,5-3cm. Hoa khá lớn, màu trắng phớt hồng hay hồng thắm (tùy giống), đài hình chng hay có 5 thùy nhỏ hình răng, tràng có cánh hình mắt chim, mọc ở nách lá dọc suốt cành. Hiện nay, ở Huế chỉ mới xuất hiện giống anh đào giả hoa trắng phớt hồng, chưa thấy giống hoa màu hồng thắm.
Bảng 2.11: Thành phần hóa học và giá trị dinh dưỡng của cây anh đào giả[8] [13] [14]
DM: vật chất khô, CP: đạm thô, EE: chất béo, CF: xơ thơ, Ash: khống tổng số. Nguồn: Anh đào giả (1): Lê Trung Kiên (1991)
Anh đào giả (2): Lưu Hữu Mãnh (1999)
Anh đào giả (3): Viện Chăn Nuôi Quốc Gia (1995)
k Cỏ đậu lá nhỏ[1] [13]
Đậu đỗ ở nước ta thường giàu protein thơ, vitamin, giàu khống Ca, Mg, Zn, Cu, Fe. Nhưng ít P, K hơn cỏ Hòa thảo. Tuy vậy hàm lượng protein thô ở đậu đỗ trung bình 167 gam/kg chất khơ, xấp xỉ giá trị trung bình của đậu đỗ nhiệt đới, thấp hơn giá trị trung bình của đậu đỗ ơn đới (175 gam/kg chất khô) theo Thành phần và giá trị dinh dưỡng thức ăn gia súc, gia cầm Việt Nam (1995).
Ưu điểm của đậu đỗ sử dụng làm thức ăn gia súc là khả năng cộng sinh với vi sinh vật trong nốt sần ở rễ nên có thể sử dụng được nitơ trong khơng khí tạo nên thức ăn giàu protein, vitamin, khoáng đa lượng và khống vi lượng mà khơng cần bón nhiều phân. Nhược điểm cơ bản của đậu đỗ làm thức ăn gia súc là chứa chất khó tiêu hóa hay độc tố làm gia súc không ăn được nhiều. Bởi vậy cần thiết phải sử dụng phối hợp
TP (%) DM CP EE CF Ash
Anh đào giả (1) Anh đào giả, lá (2) Anh đào giả (3)
20,8 22,8 22,5 23,42 23,0 20,1 4,87 6,64 5,32 21,2 11,5 17,6 11,2 10,9 7,57
với cỏ hòa thảo để nâng cao hiệu suất sử dụng thức ăn (Thành phần và giá trị dinh dưỡng thức ăn gia súc, gia cầm Việt Nam (1995)). Hiện nay ở nước ta chưa có nhiều giống đậu đỗ thức ăn xanh được sử dụng rộng rãi chỉ có giống stylo và keo giậu được chú ý hơn cả.
Bảng 2.12: Thành phần hóa học và giá trị dinh dưỡng của cỏ đậu lá nhỏ[1] [3] [13]
TP (%) DM OM CP EE NFE CF NDF Ash
Cỏ đậu lá nhỏ 15,7 89,1 19,3 7,0 38,7 24,1 49,1 10,9
DM: vật chất khô, OM: vật chất hữu cơ, CP: prôtêin thô, EE: chất béo, NDF: xơ trung tính, Ash: khống tổng số. Nguồn:Đào ĐứcTiến (2008)
l Rơm[2] [3]
Là nguồn thức ăn thô khô cho gia súc nhai lại. Rơm có giá trị dinh dưỡng thấp, chứa nhiều chất xơ khó tiêu hóa (31%-33%), nghèo protein (2,2%-3%), nghèo vitamin và muối khống theo Gởi (2005). Với đặc tính này muốn đảm bảo đầy đủ nhu cầu dinh dưỡng hàng ngày cho gia súc cần bổ sung thêm thức ăn giàu đạm. Leng et al., (1987), đã chứng minh rằng: bổ sung urê, một ít đạm thực vật và chất khoáng vào khẩu phần chủ yếu là rơm và cỏ, đã làm tăng sức sản xuất của gia súc.
Tác dụng bổ sung urê vào khẩu phần có rơm cỏ đã góp phần hiệu chỉnh sự thiếu hụt nitơ dễ tiêu (NH3) trong dạ cỏ, làm tăng tỷ lệ tiêu hóa, tăng lượng thức ăn ăn vào, tăng lượng protein vi sinh vật giúp cân bằng các axit amin tốt hơn, tăng tỷ lệ tương đối protein/năng lượng (P/E).
Bảng 2.13: Thành phần hóa học của rơm dùng trong thí nghiệm (%DM) [2] [3]
DM: vật chất khô, OM: vật chất hữu cơ, CP: prơtêin thơ, NDF: xơ trung tính, Ash: khống tổng số Nguồn: Nguyễn Hữu Lai (2008)
TP (%) DM OM CP NDF Ash
CHƢƠNG 3
PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Phƣơng tiện nghiên cứu
3.1.1 Thời gian nghiên cứu
Thí nghiệm được thực hiện trong thời gian từ 03/01/2011 đến ngày 17/04/2011.
3.1.2 Địa điểm nghiên cứu
Mẫu được phân tích tại phịng thí nghiệm Bộ mơn Chăn Nuôi - Khoa Nông nghiệp và Sinh học Ứng dụng - Trường Đại học Cần Thơ.
3.1.3 Đối tƣợng nghiên cứu
Thực liệu: lá ổi ruột đỏ; lá mận trắng; lá sắn; lá muồng trâu; lá và cọng chuối Xiêm; lá còng; vỏ măng cụt; lá và cọng cúc dại; các loại cỏ: cỏ lông tây, cỏ voi, cỏ mồm, cỏ paspalum; cây anh đào giả; rơm; cỏ đậu lá nhỏ.
3.1.4 Dụng cụ và thiết bị thí nghiệm a Dụng cụ a Dụng cụ
Cân phân tích (cân sartorius) độ chính xác 0,001g; bếp đun cách thủy; bình tam giác (v = 250ml); buret 25ml; pipet 10 - 20ml; bình định mức 250ml; bản sứ có lỗ; phễu thủy tinh; cốc bằng sứ, giấy lọc (φ11cm), rây với kích thước 0,355mm, 109 ống nghiệm loại nhỏ (φ1cm ), 6 cái khay đỡ ống nghiệm, becher 100ml, 23 bình Cruscible, 20 bình Kejhdal 50cc, phễu lọc, micropipet 10ml; 20ml, vải lọc, bình nhựa và bình thủy tinh 5 lít, khay nhơm 160 x 70cm, 2 bồn đựng nước có dung tích 100lít.
b Thiết bị
- Máy nghiền mẫu National Supber Blender 118N.
- Tủ sấy mẫu Heraues, tủ sấy (Ketong 101-TQ).
- Tủ đông Hitachi Smart Control.
- Tủ nung Carbolite 550oC.
- Bếp điện Alma 1000 W.
- Máy đo PH.
- Máy infra - red meter (Crowcon Ltd, UK).
c Hóa chất
- Dung dịch H2SO4 (d =1,84). - Axit oxalic 0,1N.
- Dung dịch indigocarmin 0,1% trong H2SO4. - Dung dịch kali pemanganat 0,1N.
- Dung dịch FeCl3 5%.
- Bột gelatin (bột da), nước cất.
3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu
Đề tài nghiên cứu gồm 2 nội dung: xác định quy trình phân tích tannin tối ưu và đánh giá ảnh hưởng của tannin lên sự sản sinh khí methane ở điều kiện in vitro
3.2.1 Xác định quy trình phân tích tannin
Quy trình xác định thành phần dưỡng chất và phân tích tannin của thực liệu dùng trong thí nghiệm
Thực liệu: thực liệu được thu cắt ngoài tự nhiên, ở khu vực xung quanh thành
phố Cần Thơ, đem phân loại nhằm mục đích loại bỏ những thực liệu hư, sau đó cắt nhỏ (kích thước khoảng 25x15mm), sau đó đem đi cân (cân sartorius) cuối cùng được xếp vào máng đi sấy.
Sấy: tùy thực liệu mà chọn nhiệt độ sấy khác nhau, nhiệt độ trong tủ sấy là
60oC, tránh sấy ở nhiệt độ q cao vì có thể làm cho thực liệu bị hư. Thông thường thực liệu ban đầu được sấy khoảng 48 giờ.
Nghiền: thực liệu sau khi sấy, ta thu được thực liệu khô, tiến hành đi cân (cân
sartorius), sau đó nghiền mịn (kích thước hạt khoảng 0,1mm), cuối cùng thực liệu khô được bảo quản trong hộp để tránh hút ẩm.
Phân tích: sau khi nghiền mịn, tiến hành xác định thành phần dinh dưỡng, định
lượng và tỷ lệ tiêu hóa in vitro.
Sơ đồ 3.1: Quy trình phân tích tổng qt Sấy khơ Nghiền mịn Phân tích tannin Thực liệu Phân tích thành phần dinh dưỡng
a Phân tích thành phần dƣỡng chất của thực liệu
Thu thập mẫu: tiến hành lấy mẫu, các mẫu thực liệu được lấy theo phương pháp
ngẫu nhiên, sau đó đem sấy ở nhiệt độ 60oC, ta được khối lượng mẫu khơ khơng khí,
mẫu khơ khơng khí được xay nhuyễn rồi đem trữ. Sau đó đem phân tích. Thành phần dưỡng chất của thực liệu: DM, OM, CP, CF, EE, NFE, NDF, ADF, Ash được xác định theo A.O.A.C (1990).
b Định lƣợng tannin bằng phƣơng pháp Loventhal I[34] Mục đích:
- Xác định hàm lượng tannin trên khối lượng chất khô (%). - Xác định khối lượng vật chất khô của thực liệu.
Tiến hành thí nghiệm Mơ tả
Cân từ 2g thực liệu khơ, cho vào cốc thủy tinh có chia độ (v =100-150ml), thêm vào đó khoảng 50-60ml nước cất đun sôi. Đặt vào bình cách thủy, đun cách thủy khoảng 15 phút. Lấy ra để yên khoảng 5 phút, lọc qua giấy lọc (11 cm) vào bình định mức 250ml. Tiếp tục chiết như trên từ 2-3 lần cho đến khi dịch chiết trắng trong hoặc khơng cịn phản ứng với dung dịch FeCl3 là được (tannin sẽ tạo thành kết tủa màu xanh nhạt hay xanh thẩm phụ thuộc vào số lượng các nhóm hydroxyphenol có trong phân tử). Dùng nước cất định mức đến vạch, lắc đều. Tiến hành định lượng. Kết quả được tính theo biểu thức.
c v k V b a X ( ) 100 %
Trong đó:
X: hàm lượng tannin xác định trên khối lượng chất khơ (%). a: lượng KMnO4 chuẩn độ ở bình thí nghiệm (ml).
b: lượng KMnO4 chuẩn độ ở bình đối chứng (ml). V: thể tích tồn bộ dịch chiết (250ml).
v: thể tích dịch chiết dùng để phân tích (10ml). c: khối lượng mẫu đem phân tích (g).
k: hệ số tannin (0,00582).
Ghi nhận kết quả
- Hàm lượng tannin trên khối lượng chất khô (%). - Xác định khối lượng vật chất khô của thực liệu.
b. Định lƣợng tannin bằng phƣơng pháp Loventhal II
c Định lƣợng tannin bằng phƣơng pháp Loventhal II[34] Mục đích:
- Xác định hàm lượng tannin trên khối lượng chất khô (%). - Xác định khối lượng vật chất khô của thực liệu.
Tiến hành thí nghiệm
Cân 2g thực liệu khơ cho vào cối sứ nghiền kỹ, thêm vào đó khoảng 50-60 ml nước cất đun sôi, lọc lấy nước cho vào bình định mức dung tích 250ml, thêm nước cất đến vạch định mức, lắc kỹ. Tiến hành định lượng. Kết quả được tính theo biểu thức.
Đun cách thủy
Sơ đồ 3.2: Quy trình phân tích tannin bằng phương pháp Loventhal I 80oC khoảng 15 phút Dùng FeCl3 5% để thử tannin Để yên 5 phút lọc bằng giấy lọc Thực liệu khơ Định lƣợng Lọc mẫu
G V k V b a X 1 100 ) ( % Trong đó:
X: hàm lượng tannin xác định trên khối lượng chất khô (%).
a: lượng KMnO4 chuẩn mẫu thử (ml).
b: lượng KMnO4 chuẩn mẫu trắng (ml).
V: thể tích tồn bộ dịch chiết (ml).
V1: thể tích dịch chiết dùng để phân tích (ml). G: khối lượng mẫu đem phân tích (g).
k: hệ số tannin (0,00478).
Ghi nhận kết quả
- Hàm lượng tannin trên khối lượng chất khô (%). - Xác định khối lượng vật chất khô của thực liệu.
d Định lƣợng tannin bằng phƣơng pháp oxy hóa (DĐVN I)[30] Mục đích:
- Xác định hàm lượng tannin trên khối lượng chất khô (%). - Xác định khối lượng vật chất khô của thực liệu.
Cối (đựng mẫu) Nước cất đun sôi ở
100oC
Sơ đồ 3.3: Quy trình phân tích tannin bằng phương pháp Loventhal II Dùng FeCl3 5%
để thử tannin Xử lý sạch (phân loại) bằng rây Thực liệu khô
Lọc mẫu
Tiến hành thí nghiệm Mơ tả
Cân chính xác 2g thực liệu đã tán nhỏ qua rây số 355 (kích thước mắt rây 0,355mm) cho vào 1 bình nón. Đổ thêm 50ml nước sơi và đun cách thủy, vừa đun vừa khuấy trong 30 phút. Để yên vài phút rồi lọc qua bơng vào một bình định mức 250ml. Chú ý đừng để thực liệu rơi trên bông. Tiếp tục chiết như trên vài lần cho tới khi dịch
chiết không cho phản ứng với dung dịch FeCl3. Để nguội rồi cho thêm nước vào bình
định mức tới vạch. Tiến hành định lượng. Kết quả được tính theo biểu thức.
Trong đó:
X: hàm lượng tannin xác định trên khối lượng chất khô (%).
a: lượng KMnO4 chuẩn mẫu thử (ml).
b: lượng KMnO4 chuẩn mẫu trắng (ml). V: thể tích tồn bộ dịch chiết (ml).
v: thể tích dịch chiết dùng để phân tích (ml). G: khối lượng mẫu đem phân tích (g).
k: hệ số tannin (0,004157).
Đun cách thủy
Sơ đồ 3.4: Quy trình phân tích tannin bằng phương pháp oxy hóa (DĐVN I)
Lọc bằng bơng Dùng FeCl3 5% để thử tannin Khoảng 30 phút, để yên 5 phút Rây thực liệu (0,355mm) Thực liệu khô Định lƣợng Lọc mẫu G V k V b a X 1 100 ) ( %
e Định lƣợng tannin bằng phƣơng pháp bột da (DĐVN IV)[30]
Mục đích:
- Xác định hàm lượng tannin trong thực liệu khô (%). - Xác định phần chất chiết được trong nước T1 (g).
- Xác định chất chiết được trong nước không liên kết với bột da T2 (g). - Xác định chất chiết được trong nước liên kết với bột da T0 (g).
Tiến hành thí nghiệm
Cân chính xác một khối lượng thực liệu đã rây qua rây số 355 (kích thước mắt rây 0,355mm) và chứa khoảng 1g tannin, cho vào 1 bình nón, thêm 150ml nước và đun trên cách thủy trong 30 phút. Để nguội, chuyển hỗn hợp vào bình định mức 250ml, thêm nước vừa đủ tới vạch, lọc. Dịch lọc này dùng làm dung dịch thử.
Định lượng toàn phần chất chiết được trong nước: lấy chính xác 25ml dung dịch thử đem bốc hơi đến khô, sấy cắn ở 1050C trong 3 giờ. Cân, được khối lượng T1 (g).
Định lượng chất chiết được trong nước khơng liên kết với bột da: lấy chính xác 100 ml dung dịch thử, thêm 6g bột da khô (TT). Lắc đều trong 15 phút và lọc. Lấy chính xác 25ml dịch lọc đem bốc hơi đến khô, sấy cắn ở 1050C trong 3 giờ. Cân, được khối lượng T2 (g).
Định lượng chất chiết được trong thực liệu liên kết với bột da: lấy chính xác 100ml nước cất, thêm 6 g bột da khô (TT). Lắc đều trong 15 phút và lọc. Lấy chính xác 25ml dịch lọc bốc hơi đến khô, sấy cắn ở 1050C trong 3 giờ. Cân được khối lượng T0 (g). Kết quả được tính theo biểu thức.
Đun cách thủy
Sơ đồ 3.4: Quy trình phân tích tannin bằng phương pháp bột da (DĐVN IV) Sấy ở nhiệt độ ổn định 30o C Sấy ổn định ở 150oC Lọc mẫu Tính trên DM Khoảng 30 phút, để nguội Rây Cân mẫu (sau sấy) Thực liệu
sau khi rây Sấy khô
% 1 2 010100 a T T T T Trong đó:
T: hàm lượng tannin xác định trên khối lượng chất khô (%). T1: phần chất chiết được trong nước(g).
T2: phần chất chiết được trong nước không liên kết với bột da(g). T0: phần chất chiết được trong nước liên kết với bột da (g).
a: khối lượng thực liệu khô (g).
Ghi nhận kết quả
- Hàm lượng tannin trong thực liệu khô (%). - Phần chất chiết được trong nước T1 (g).
- Chất chiết được trong nước không liên kết với bột da T2 (g). - Chất chiết được trong nước liên kết với bột da T0 (g).
e Xử lý số liệu
- Số liệu thành phần dưỡng chất của thực liệu được ghi nhận và xử lý bằng chương trình Microsoft Excell 2007. Các thực liệu được tiến hành phân tích với 3 lần lặp lại và lấy kết quả trung bình.