CHƢƠNG 2 : VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4Phƣơng pháp nghiên cứu
Xác định hàm lƣợng polyphenol tổng
- Hàm lượng polyphenol tổng được xác định theo phương pháp của II Sook Choi và cộng sự (2014) [6].
- Nguyên tắc: phương pháp Folin-Ciocalteu dùng để đo tổng lượng polyphenol dựa vào
việc vận chuyển electron từ các phân tử polyphenol sang thuốc thử Folin-Ciocalteu. Chất nhận điện tử trong thuốc thử là Mo6+ (màu vàng) và Vo6+ sẽ chuyển sang Mo5+ (màu xanh) và Vo5+ (màu xanh). Hấp thu cực đại ở bước sóng 750 nm [6]. Acid gallic được sử dụng như là chất chuẩn tham khảo và kết quả được quy tương đương theo số mg acid gallic/1 gam của nguyên liệu (mg GAE/g chất khơ) [55].
Xác định hoạt tính kháng oxy hóa dựa trên vào khả năng khử gốc tự do 1,1 –
diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)
- Là phương pháp được xác định theo phương pháp của II Sook Choi và cộng sự (2014) với một vài hiệu chỉnh nhỏ. Khả năng bắt gốc tự do DPPH được thể hiện thông qua sự giảm độ hấp thu ở bước sóng 517nm, do gốc DPPH bị khử bởi các thành phần kháng oxy hóa trong mẫu khảo sát.
- Nguyên tắc: DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) là một gốc tự do bền có màu tím đậm.
Dung dịch DPPH có cực đại hấp thu tại bước sóng 517nm và sản phẩm khử của nó là 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazine (DPPH-H) có màu vàng nhạt. Các chất có khả năng kháng oxy hóa sẽ trung hịa gốc tự do DPPH• bằng cách cho hydro, đình chỉ q trình oxy hóa bằng sự chuyển các gốc tự do sang trạng thái ổn định hơn, làm giảm độ hấp thu tại bước sóng cực đại và màu của dung dịch sẽ nhạt dần, chuyển từ tím sang vàng nhạt [57].
Hình 2.10. Cơ chế hoạt động của DPPH và chất kháng oxy hóa
- Khả năng khử gốc tự do DPPH được xác định theo công thức:
- Trong đó:
Abs control: là độ hấp thu của mẫu trắng gồm DPPH và Methanol, được đo ở 0 phút.
Abs test: là độ hấp thu của mẫu thử gồm DPPH và dịch trích, được đo sau 30 phút giữ trong tối.