thủy sản
PHƯƠNG PHÁP ĐịNH LƯỢNG ARSENIC TRONG THỦY SẢN VÀ SẢN PHẨM THỦY SẢN BẰNG MÁY QUANG PHỔ HẤP THU NGUYÊN TỬ (AAS) 1 Phạm vi áp dụng
Phương pháp này mô tả cách xác định hàm lượng arsenic (As) trong thủy sản và sản phẩm thủy sản bằng máy quang phổ hấp thu nguyên tử (AAS). Giới hạn phát hiện của phương pháp 20ppb.
2 Nguyên tắc
Arsenic trong thủy sản và sản phẩm thủy sản tồn tại ở dạng vô cơ lẫn hữu cơ. Vì vậy để xác định được ta phải chuyển tất cả về dạng vô cơ bằng acid có nồng độ cao ở nhiệt độ và áp suất cao. Arsenic được khử bằng NaBH4 trong bộ hóa hơi. Sau đó được xác định bằng máy phổ hấp thu nguyên tử (AAS) tại bước sóng 193.7nm.
3 Thiết bị, dụng cụ 3.1 Thiết bị
Hệ thống máy phổ hấp thu nguyên tử bao gồm: - Bộ phận làm lạnh - Bộ hóa hơi - Bộ bơm mẫu tự động - Hệ thống đèn - Máy AAS Máy Multiwave 3000. Cân kỹ thuật có độ chính xác 0.001g. 3.2 Dụng cụ - Pipetteman 100µl, 1000µl, 5000µl. - Máy xay mẫu.
- Bình định mức 10ml. - Pipette Pasteur.
- Ống Teplon phá mẫu.
4 Hóa chất, thuốc thử 4.1 Hóa chất
- Dung dịch As chuẩn, Merck (hoặc tương đương)
- Nước cất một lần.
- HNO3 1.5%, Merck (hoặc tương đương) - H2O2 30%, Merck (hoặc tương đương) - Dung dịch NaBH4 0.6% + NaOH 0.5%. - Acid ascorbic
- KI
4.2 Dung dịch, thuốc thử
4.2.1 Dung dịch chuẩn trung gian As 10ppm
Hút chính xác 100µl dung dịch As chuẩn 1000ppm vào bình định mức
10ml định mức bằng dung dịch HNO3 1.5%.
Bảo quản trong tủ lạnh nhiệt độ từ 2-80C. Hạn sử dụng 3 tháng. 4.2.2 Dung dịch chuẩn làm việc As 100ppb
Hút chính xác 500µl dung dịch chuẩn 10ppm vào bình định mức 50ml
Bảo quản trong tủ lạnh nhiệt độ từ 2-80C. Hạn sử dụng 1 tháng. 4.2.3 Dung dịch HNO3 1.5%
Hút 23 ml HNO3 65% cho vào bình định mức 1000ml, định mức bằng nước cất đến vạch. Hạn sử dụng trong 1 năm, bảo quản ở nhiệt độ phòng.
4.2.4 Dung dịch NaBH4 0.6% + NaOH 0.5%
Cân chính xác 0.3g NaBH4 và 0.5g NaOH vào bình định mức 100ml định mức bằng nước cất đến vạch. Pha trước khi chạy máy.
4.2.5 Dung dịch KI 20%
Cân chính xác 20g KI cho vào bình định mức 100ml và định mức đến vạch bằng nước cất.
4.2.6 Dung dịch acid ascorbic 20%
Cân chính xác 20g acid ascorbic cho vào bình định mức 100ml và định mức đến vạch bằng nước cất.
5 Chuẩn bị mẫu 5.1 Chuẩn bị mẫu thử
Đồng nhất tối thiểu 200g mẫu trên máy xay mẫu. Đối với mẫu khô thì cắt hoặc giã nhỏ. Giử mẫu trong tủ đông -180C cho đến khi phân tích.
Cân 1g ± 0.05g mẫu đã đồng nhất vào ống Teplon để phá mẫu. Sau đó thêm 1ml HNO3 65% và 3ml H2O2 30%.và 2ml H2O (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
5.2 Chuẩn bị mẫu nước trắng
Hút 1ml nước cất vào ống Teplon, rồi thực hiện như mẫu thử. 5.3 Chuẩn bị mẫu thủy sản trắng và mẫu kiểm soát (As 100ppb)
5.4 Mẫu thủy sản trắng: Cân 1g ± 0.05g mẫu thủy sản trắng đã được chọn trước vào ống Teplon, sau đó thực hiện như mẫu thử.
5.5 Mẫu kiểm soát (As 20ppb)
Hút chính xác 200µl dung dịch arsenic chuẩn 100ppb và cân 1g ± 0.05g mẫu thủy sản trắng đã được chọn trước vào ống Teplon, sau đó thực hiện như mẫu thử.
5.6 Vô cơ hóa mẫu
Đặt ống Teflon chứa mẫu vào rotor của máy Multiwave 3000, chạy máy theo chương trình đã được cài đặt.
Bảng 4.12. Các thông số cài đặt trên máy phá mẫu Multiwave 3000 Ph Power Ramp Hold Fan
1 250 01:00 06:00 1 2 400 02:00 05:00 1 3 600 05:00 35:00 1
4 0 30:00 3
Sau khi phá mẫu, cho vào bình định mức 20ml, thêm 1,5ml dung dịch KI 20% + 1ml dung dịch acid ascorbic 20% + 0,5ml dung dịch HCl 37%. Sau đó định mức bằng nước cất cho đến vạch.
5.7 Dựng đường chuẩn
Pha từ dung dịch chuẩn làm việc As 100ppb pha loãng vào bình định mức 20ml. Pha theo bảng sau:
Bảng 4.13. Thể tích chuẩn As 100ppb thêm vào để dựng đường chuẩn As Thể tích(µl) Nồng độ (ppb) 100 0.5 200 1 400 2 1000 5 2000 10
6 Đo trên máy hấp thu nguyên tử AAS
6.1 Các thông số chạy máy
Element - Matrix: As - Instrument Type: Flame Conc. Units: ug/L
Instrument Mode: Absorbance Sampling Mode: Manual
Calibration Mode: Concentration Measurement Mode: PROMT Precision Standard: 1.0 % Precision Sample: 1.0 % Expansion Factor: 1.0 Minimum Reading: Disabled Smoothing: 7 point Conc. Dec. Places: 2
Wavelength: 193.7 nm Slit Width: 0.5 nm Gain: 72 % Lamp Current: 10.0 mA Lamp Position: 1 Background Correction: BC On STANDARD 1: 0.50 ug/L STANDARD 2: 1.00 ug/L STANDARD 3: 2.00 ug/L STANDARD 4: 5.00 ug/L STANDARD 5: 10.00 ug/L Reslope Rate: 50
Reslope Standard No.: 3 Reslope Lower Limit: 75.0 % Reslope Upper Limit: 125.0 % Recalibration Rate: 100 Calibration Algorithm: Linear Cal. Lower Limit: 20.0 % Cal. Upper Limit: 150.0 %
SIPS: Off
Measurement Time: 10.0 s Pre-Read Delay: 45 s
Flame Type: Air/Acetylene Air Flow: 13.80 L/min Acetylene Flow: 2.25 L/min Burner Height: 0.0 mm
6.2 Chạy máy
- Tiêm dung dịch chuẩn để dựng đường chuẩn độ hồi qui tuyến tính R2≥98%.
- Tiêm dung dịch chuẩn để kiểm tra độ nhạy của máy. - Tiêm mẫu trắng.
- Tiêm mẫu kiểm tra. - Tiêm mẫu thật. 7 Tính toán
Nồng độ của As trong mẫu được tính như sau: K = (CAs*V*100)/R*m
Trong đó: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
CAs : nồng độ của As trong mẫu tính từ đường chuẩn (ppb). V : thể tích cuối của dung dịch.
R : Độ thu hồi của mẫu kiểm soát. m : khối lượng của mẫu.
8 Kết quả
Kết quả phân tích As được thể hiện trong phụ lục 3: Bảng báo cáo kết quả phân tích As.
Ngày 22/04/2009 khảo sát độ tuyến tính của đường chuẩn trong khoảng nồng độ từ 0.5ppb đến 10ppb
Bảng 4.14. Mối liện hệ giữa nồng độ và độ hấp thu của As khi chạy chuẩn Nồng độ, ppb (Conc) Độ hấp thu (Abs) As 1 As 2 As 3 0 0.0086 0.0003 -0.0001 0.5 0.0377 0.014 0.0246 1 0.0476 0.0337 0.0392 2 0.0669 0.0572 0.0704 5 0.1383 0.1408 0.1568 10 0.2289 0.2305 0.2513 y = 0.0212x + 0.0226 R2 = 0.9892 y = 0.0232x + 0.0079 R2 = 0.9878 y = 0.0248x + 0.0138 R2 = 0.9844 -0.05 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0 2 4 6 8 10 12 Conc A b s As 1 As 2 As 3 Linear (As 1) Linear (As 2) Linear (As 3)
Hình 4.1 Đồ thị khảo sát độ tuyển tính của As trong khoảng nồng độ từ 0.5ppb đến 10ppb
Kết quả: độ tuyến tính của As trong khoảng từ 0.5ppb đến 10ppb rất tốt, hệ số hồi qui >0,98
Ngày 25/04/2009 chạy trên nền mẫu để khảo sát độ thu hồi
Bảng 4.15. Độ thu hồi của As trên mẫu spike 20ppb và mẫu spike 100ppb Mẫu Spike 20ppb R% Spike 100ppb R% Tôm 1.18 118 4.94 98.80 Tôm 0.41 41 4.33 86.60 Tôm 0.71 71 3.51 70.20 Tôm 1.09 109 4.79 95.80 Tôm 0.33 33 3.35 67.00 Tôm 0.58 58 3.79 75.80 Trung bình 0.72 71.67 4.12 82.37 Kết quả: độ thu hồi đạt được trong khoảng từ 67% đến 98%
Ngày 28/04/2009 – 05/05/2009 khảo sát độ lặp lại, độ tái lặp tại 20ppb độ lặp lại trên mẫu tôm ở 1ppb, định mức 20ml
Bảng 4.16. Độ tái lặp trên các nền mẫu khác nhau tại 20ppb
Mẫu Cá Tôm Mực Spike 20ppb 1.16 1.18 0.6 Spike 20ppb 0.48 0.41 0.97 Spike 20ppb 0.29 0.71 0.05 Spike 20ppb 1.44 1.09 0.56 Spike 20ppb 0.27 0.33 0.02 Spike 20ppb 0.07 0.58 0.42 Trung bình 0.6183 0.7167 0.4367 Độ lệch chuẩn 0.5509 0.3511 0.3605
Độ lệch chuẩn tương đối 89.0952 48.9898 82.5529
Độ tái lặp của mẫu tôm ở 1ppb, định mức 20ml thực hiện trong 3 ngày khác nhau
Bảng 4.17. Độ lặp lại trên mẫu tôm spike 1ppb ở 3 ngày khác nhau Ngày 1 2 3 Spike 20ppb 14 0.91 1.18 Spike 20ppb 17.2 0.55 0.41 Spike 20ppb 16.8 0.5 0.71 Spike 20ppb 14 0.46 1.09 Spike 20ppb 13 0.65 0.33 Spike 20ppb 10 0.45 0.58 Trung bình 14.167 0.5867 0.3300 Độ lệch chuẩn 2.6425 0.1744 0.3511 Độ lệch chuẩn tươngđối 18.6528 29.7328 106.3920 Độ lệch chuẩn trung bình 1.0560
Độ lệch chuẩn tương đốitrung
bình 51.5925
Kết quả: độ lặp lại và độ tái lặp của phương pháp định lượng As tại nồng độ 20ppb là tương đối tốt
Ngày 06/05/2009 tính LOD cho phương pháp
Bảng 4.18. Độ hấp thu của As khi chạy 20 mẫu spike 20ppb và 20 mẫu blank
Mẫu
Abs Mẫu Abs Spike 20ppb 0.0364 Blank 01 -0.0055 Spike 20ppb 0.0275 Blank 02 -0.0044 Spike 20ppb 0.0263 Blank 03 -0.0038 Spike 20ppb 0.0253 Blank 04 -0.012 Spike 20ppb 0.0299 Blank 05 -0.0119 Spike 20ppb 0.025 Blank 06 -0.0153 Spike 20ppb 0.0237 Blank 07 0.0108 Spike 20ppb 0.0248 Blank 08 0.0134 Spike 20ppb 0.0189 Blank 09 0.0025 Spike 20ppb 0.0163 Blank 10 0.0066 Spike 20ppb 0.0177 Blank 11 0 Spike 20ppb 0.0177 Blank 12 -0.0027 Spike 20ppb 0.0177 Blank 13 -0.013 Spike 20ppb 0.0166 Blank 14 -0.016 Spike 20ppb 0.0158 Blank 15 -0.0167 Spike 20ppb 0.0166 Blank 16 -0.017 Spike 20ppb 0.0136 Blank 17 -0.0185 Spike 20ppb 0.0221 Blank 18 -0.0192 Trung bình 0.0218 Trung bình -0.0068
Kết quả: độ hấp thu trung bình ở nồng độ 1ppb là 0.0218 lớn hơn gấp 3 lần độ hấp thu trung bình của Blank. Vậy LOD của phương pháp là 20ppb.
Chương V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận
Do thời gian có hạn nên việc tìm hiểu cũng chỉ giới hạn trong khoảng thời gian thực tập tại công ty. Trên đây là những phương pháp phân tích dư lượng kháng sinh, hóa chất, thuốc trừ sâu trong thủy sản và sản phẩm thủy sản được tìm hiểu trong suốt quá trình thực tập và ghi nhận lại
Đối với phương pháp phân tích hàm lượng Arsenic tổng số trong thủy sản và sản phẩm thủy sản do có điều kiện tham gia trực tiếp tìm phương pháp và đã thu được những kết quả ban đầu:
- Phương pháp: đo bằng phương pháp quang phổ hấp thu nguyên tử
dùng ngọn lửa (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Độ thu hồi: độ thu hồi đạt được trong khoảng từ 67% đến 98%
- Giới hạn phát hiện của phương pháp: 20ppb
5.2 Đề xuất
Cần phải nghiên cứu thêm để tìm hiểu những nguyên nhân gây ra hiệu suất thấp cho phương pháp phân tích hàm lượng As trong thủy sản và sản phẩm thủy sản . Từ đó có những biện pháp khắc phục để hoàn thiện phương pháp hơn, cho hiệu suất cao và được áp dụng rộng rãi hơn.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
–&—
1 Quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/2/2005 của Bộ Thuỷ sản về ban hành danh mục hoá chất, kháng sinh cấm và hạn chế sử dụng trong sản xuất, kinh doanh thuỷ sản
2 Trần Thị Kim Giang, 2006. Luận văn tốt nghiệp đại học – Xác định dư lượng Malachite Green trong thủy sản bằng sắc kí lỏng cao áp ghép khối phổ.
3 Trần Minh Phú, Vương Thanh Tùng, Lê Bảo Ngọc – Khoa Thủy Sản – Trường Đại Học Cần Thơ. Bài giảng Phân Tích Thực Phẩm Thủy Sản.
4 Các trang Web:
www.vienkinhte.hochiminhcity.gov.vn http://chemvn.net
www.fistenet.gov.vn
5 28 TCN194 : 2004: Các chất chuyển hoá thuộc nhóm Nitrofuran trong thuỷ sản và sản phẩm thuỷ sản - Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng khối phổ-khối phổ.
6 28 TCN196 : 2004: Sulfonamit trong sản phẩm thuỷ sản - Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao.
7 28 TCN 177 : 2002 Hàm lượng thuốc kháng sinh nhóm Tetracyclin
trong sản phẩm thủy sản
8 Hàm lượng thuốc kháng sinh nhóm tetracyclin trong sản phẩm thuỷ sản - Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao
9 28 TCN 178 : 2002 Hàm lượng axit oxolinic trong sản phẩm thủy sản -
Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao
10 28 TCN 186 : 2003 Hàm lượng cloramphenicol trong sản phẩm thuỷ
sản - Phương pháp định lượng bằng sắc ký khí
11 28TCN 160:2000 Hàm lượng thuỷ ngân trong thủy sản - Phương pháp
định lượng bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử
12 28TCN 161:2000 Hàm lượng chì trong thủy sản - Phương pháp định
lượng bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử
13 28TCN 162:2000 Hàm lượng cađimi trong thủy sản - Phương pháp định lượng bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử
14 Determination and Confirmation of Leucomalachite Green in Salmon
using No-Discharge Atmospheric Pressure Chemical Ionization LC-MSn www.cfsan.fda.gov/~frf/lib4333.pdf
www.vienkinhte.hochiminhcity.gov.vn/xemtin.asp?idcha=2806&cap=3&i d=3200
16 Determination of Chloramphenicol Residues in Shimp and Crab Tissues by Electrospay Triple Quadrupole LC/MS/MS. Joe Strey, Al Plenning, Sherri Turnipseed, Gene Nandrea, Rebecca Lee, Cathy Burns, Mark Madson (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
www.foodsafety.gov/~frf/lib4306.html
17 Detection of Nitrofuran Metabolites in Shrimp http://www.cfsan.fda.gov/~comm/methnf.html
PHỤ LỤC
–&—
Phụ lục 1
DANH MỤC HOÁ CHẤT, KHÁNG SINH CẤM SỬ DỤNG TRONG SẢN XUẤT, KINH DOANH THỦY SẢN
(Ban hành kèm theo Quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24 tháng 2 năm 2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản)
TT Tên hoá chất, kháng sinh Đối tượng áp dụng 1 Aristolochia spp và các chế phẩm từ chúng 2 Chloramphenicol 3 Chloroform 4 Chlorpromazine 5 Colchicine 6 Dapsone 7 Dimetridazole 8 Metronidazole
9 Nitrofuran (bao gồm cảFurazolidone) 10 Ronidazole
11 Green Malachite (Xanh Malachite) 12 Ipronidazole 13 Các Nitroimidazole khác 14 Clenbuterol 15 Diethylstibestrol (DES) 16 Glycopeptides 17 Trichlorfon (Dipterex)
Thức ăn, thuốc thú y, hoá chất, chất xử lý môi trường, chất tẩy rửa khử trùng, chất bảo quản, kem bôi da tay trong tất cả các khâu sản xuất giống, nuôi trồng động thực vật dưới nước và lưỡng cư, dịch vụ nghề cá và bảo quản, chế biến.
Phụ lục 2
DANH MỤC CÁC HOÁ CHẤT, KHÁNG SINH HẠN CHẾ SỬ DỤNG TRONG SẢN XUẤT KINH DOANH THỦY SẢN
(Ban hành kèm theo Quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24 tháng 2 năm 2005 của Bộ trưởng Bộ Thủy sản)
TT Tên hoá chất, kháng sinh Dư lượng tối đa(ppb)*
Mục đích sử dụng
Thời gian dừng thuốc trước khi thu hoạch làm thực phẩm 1 Amoxicillin 50 2 Ampicillin 50 3 Benzylpenicillin 50 4 Cloxacillin 300 5 Dicloxacillin 300 6 Oxacillin 300 7 Danofloxacin 100 8 Difloxacin 300 9 Enrofloxacin 100 10 Ciprofloxacin 100 11 Oxolinic Acid 100 12 Sarafloxacin 30 13 Flumepuine 600 14 Colistin 150 15 Cypermethrim 50 16 Deltamethrin 10 17 Diflubenzuron 1000 18 Teflubenzuron 500 19 Emamectin 100 20 Erythromycine 200 21 Tilmicosin 50 22 Tylosin 100 23 Florfenicol 1000 24 Lincomycine 100 25 Neomycine 500 26 Paromomycin 500 27 Spectinomycin 300 28 Chlortetracycline 100 Dùng làm nguyên liệu sản xuất thuốc thú y cho đông, thực vật thủy sản và lưỡng cư Cơ sở SXKD phải có đủ bằng chứng khoa học và thực tiễn về thời gian thải loại dư lượng thuốc trong động, thực vật dưới nước và lưỡng cư xuống dưới mức giới hạn cho phép cho từng đối tượng nuôi và phải ghi thời gian ngừng sử dụng thuốc trước khi thu hoạch trên nhãn sản phẩm
29 Oxytetracycline 100 30 Tetracycline 100 31 Sulfonamide (các loại) 100 32 Trimethoprim 50 33 Ormetoprim 50 34 Tricainemethanesulfonate 15-330
* Tính trong động, thực vật dưới nước, lưỡng cư và sản phẩm động, thực vật dưới nước, lưỡng cư