Trƣớc khi giải phẫu, kéo dãn đốt sống lƣng để chuột khơng cịn cảm giác và khả n ng cử động. Chuột sau khi đã bất động đƣợc đặt ngửa lên và cố định 4 chi. Các bƣớc A, B, C lần lƣợt mở lồng ngƣợc và khoang bụng của chuột ra. Sau khi mở khoanh bụng s quan sát đƣợc nội tạng bên trong. Bƣớc D, E phục vụ cho việc lấy máu để đo các chỉ tiêu sinh hóa. Có thể dùng ống tiêm lấy trực tiếp từ tim chuột hoặc cắt đứt động mạch chủ cho máu tràn ra để dễ lấy máu. Sau khi đã lấy máu, các bƣớc còn lại F, G, H, I chuột đƣợc mở rộng khoang bụng hơn, bƣớc này nhằm lấy các nội tạng cần phân tích bên trong cơ thể chuột.
Formol 10 thƣờng sử dụng để bảo quản nội tạng động vật trong phịng thí nghiệm vì có tính khử trùng mạnh nên nó dùng làm tác nhân ng n chặn vi khuẩn xâm nhập, giúp mô và tế bào không bị phân hủy. Rửa các mẫu nội tạng bằng nƣớc muối 35 để làm sạch trƣớc khi ngâm formol. Việc bảo quản formol có thể kéo dài thời gian bảo quản lên đến rất lâu. Cần thay dịch formol 4 ngày/1 lần bởi dịch lúc này đã có sự nhiễm bẩn.
32
7. Nhuộm tiêu bản
Có nhiều phƣơng pháp làm tiêu bản để nghiên cứu trong đó phƣơng pháp làm tiêu bản hiển vi cố định và nhuộm màu là phƣơng pháp phổ biến dùng trong xét nghiệm mẫu bệnh so với mẫu đối chứng. Phƣơng pháp này nhằm tạo đƣợc những mảnh mỏng, trong suốt của mô ở cơ quan, cho phép quan sát đƣợc dƣới kính hiển vi dễ dàng thấy đƣợc nhân tế bào, tế bào chất. Thêm vào đó tiêu bản s đƣợc nhuộm kép bằng Hematoxylin và Eosin Y, các phần tiêu bản có màu sắc khác nhau giúp cho việc quan sát dễ dàng. Cụ thể các thành phần có tính acid của tế bào bắt màu với thuốc nhuộm hematoxylin cho màu xanh tím. Eosin làm cho tế bào chất, mơ liên kết, collagen có màu hồng khi quan sát dƣới kính hiển vi.
Tiến hành bằng cách tách lấy một thùy nhỏ của gan chuột thí nghiệm ngâm trong dung dịch formol 10% ít nhất 24 giờ, xử lý và tiến hành tẩm paraffin-xylen, đúc khn theo qui trình thực hiện tiêu bản mơ học của (Saalu và cộng sự, 2012) có hiệu chỉnh. Mẫu đƣợc cắt bằng microtome thành các lát cắt có độ dày 5 µm, khử paraffin, nhuộm với Hematoxylin và Eosin, quan sát dƣới kính hiển vi để đánh giá mơ học.
8. Đo các chỉ tiêu sinh hóa
8.1. Đo đƣờng huyết cấp tính (Oral Glucose tolerance test)
Thí nghiệm đo đƣờng huyết cấp tính giúp xác định sự ảnh hƣởng của các thành phần hóa học (Protein, lipid, carbohydrate,..) trong cá tra ảnh hƣởng đến chuyển hóa glucose. Để đánh giá khả n ng dung nạp glucose và kiểm tra cân bằng nội môi glucose đối với động vật thử nghiệm (Ibrahim và cộng sự, 2011). Theo (Wang và cộng sự, 2019), các xét nghiệm đƣờng huyết đƣợc thực hiện bằng cách bơm glucose 7,5% (w/v) trực tiếp vào đƣờng uống với liều lƣợng 0,5 ml cơ thể sau 16 giờ nhịn n. Nồng độ glucose trong máu đƣợc đo từ việc lấy máu trong tĩnh mạch đuôi ở 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180 và 240 phút bằng máy đo Accu-Chek (Roche Diagnostics, Toronto, ON, Canada) (phạm vi đo 10-600
mg/dL hoặc 0,6-33,3 mmol/L). Diện tích đƣợc tạo ra dựa trên đƣờng cong của đồ thị đƣờng
huyết s đƣợc tính toán và sử dụng nhƣ một tham số để đánh giá khả n ng dung nạp glucose trực tiếp bằng đƣờng uống.
33