Chương 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.4. Phương phỏp nghiờn cứu
2.4.5. Đỏnh giỏ tỏc dụng của OS35 trờn chuột cống trắng đực bị gõy suy
giảm sinh sản bởi natri valproat
Natri valproat là một thuốc chống động kinh được sử dụng rộng rói. Trờn cơ quan sinh sản, natri valproat đó được chứng minh làm giảm nồng độ FSH, LH và testosteron mỏu trờn chuột thực nghiệm [108],[109]. Cỏc nghiờn cứu về độc tớnh sinh sản của natri valproat cũng cho thấy natri valproat làm giảm cỏc chỉ số sinh sản như làm giảm số lượng tinh trựng ở đuụi mào tinh, giảm độ di động của tinh trựng, thay đổi hỡnh thỏi và cấu trỳc của tinh trựng cũng như tinh hoàn [108],[109].
Chớnh vỡ thế, trong nghiờn cứu này natri valproat được sử dụng như một tỏc nhõn gõy suy giảm sinh sản cho chuột đực trờn thực nghiệm, trờn cơ sở đú đỏnh giỏ tỏc dụng của OS35.
2.4.5.1. Đỏnh giỏ tỏc dụng bảo vệ của OS35 trờn chuột cống trắng đực gõy suy giảm sinh sản bằng natri valproat
Chuột cống đực trưởng thành, được chia ngẫu nhiờn thành 3 lụ, được cho uống thuốc 2 lần/ngày như sau:
- Lụ 1: Lần 1 uống natri clorid 0,9% 10ml/kg/ngày; lần 2 uống dung mụi pha thuốc CMC 0,5%.
- Lụ 2: Lần 1 uống natri valproat 500 mg/kg/ngày; lần 2 uống dung mụi pha thuốc CMC 0,5%.
- Lụ 3: Lần 1 uống natri valproat 500 mg/kg/ngày; lần 2 uống OS35 150mg/kg/ngày được pha trong dung mụi CMC 0,5%.
Chuột được cho uống như trờn liờn tục trong 7 tuần, khoảng cỏch giữa 2 lần uống trong ngày cỏch nhau ớt nhất 2 giờ. Sau 5 tuần, tiến hành ghộp chuột, 1 chuột đực được ghộp ngẫu nhiờn cựng một chuồng với 2 chuột cỏi trong 2 tuần. Sau 7 tuần nghiờn cứu, đỏnh giỏ cỏc chuột như sau:
- Với chuột đực, tiến hành mổ và đỏnh giỏ cỏc chỉ số:
+ Trọng lượng cỏc cơ quan sinh dục (tinh hoàn, tỳi tinh, tuyến Cowper, đầu dương vật, tuyến tiền liệt, cơ nõng hậu mụn – hành hang).
+ Mật độ tinh trựng và tỷ lệ tinh trựng sống.
+ Mức độ di động của tinh trựng (tỉ lệ tinh trựng cú tiến tới, tỉ lệ tinh trựng tiến tới nhanh, tỉ lệ tinh trựng khụng tiến tới, tỉ lệ tinh trựng khụng di động).
+ Làm tiờu bản hỡnh thỏi mụ học của tinh hoàn với kĩ thuật nhuộm Hematoxyline-Eosin (HE); đỏnh giỏ hỡnh thỏi mụ học của tinh hoàn.
+ Làm tiờu bản hỡnh thỏi của tinh trựng với kĩ thuật nhuộm papanicolaou; đỏnh giỏ hỡnh thỏi tinh trựng.
+ Lấy mỏu, li tõm tỏch huyết thanh để làm xột nghiệm định lượng nồng độ testosteron.
- Với chuột cỏi: ngày thứ 14 đến 17 sau khi thụ thai, giết chuột để đỏnh giỏ cỏc chỉ số:
+ Tỉ lệ chuột cỏi cú chửa (%).
+ Số hoàng thể trung bỡnh/1 chuột mẹ. + Số thai đậu trung bỡnh/1 chuột mẹ.
+ Số thai phỏt triển bỡnh thường/1 chuột mẹ. + Tỉ lệ thai chết sớm (%).
+ Tỉ lệ thai chết muộn (%).
Cỏc chỉ số nghiờn cứu được so sỏnh giữa cỏc lụ với nhau.
2.4.5.2. Đỏnh giỏ tỏc dụng phục hồi của OS35 trờn chuột cống trắng đực gõy suy giảm sinh sản bằng natri valproat
Chuột cống đực trưởng thành, được chia ngẫu nhiờn thành 3 lụ, được cho uống thuốc như sau:
+ Lụ 1: Uống natri clorid 0,9% 10ml/kg/ngày trong 7 tuần đầu, sau đú uống CMC 0,5% 10ml/kg/ngày trong 10 ngày tiếp theo.
+ Lụ 2: Uống natri valproat 500 mg/kg/ngày trong 7 tuần đầu, sau đú uống CMC 0,5% 10ml/kg/ngày trong 10 ngày tiếp theo.
+ Lụ 3: Uống natri valproat 500 mg/kg/ngày trong 7 tuần đầu và OS35 150mg/kg/ngày trong 10 ngày tiếp theo.
Sau 7 tuần uống natri valproat hoặc natri clorid, chuột được cho uống thuốc thử hoặc dung mụi pha thuốc với thể tớch 1ml/100g cõn nặng trong 10 ngày. Sau 10 ngày uống thuốc thử hoặc dung mụi pha thuốc, tiến hành ghộp chuột, 1 chuột đực được ghộp ngẫu nhiờn cựng một chuồng với 2 chuột cỏi trong 2 tuần. Sau 2 tuần ghộp, đỏnh giỏ cỏc chuột như sau:
- Với chuột đực, tiến hành mổ và đỏnh giỏ cỏc chỉ số:
+ Trọng lượng cỏc cơ quan sinh dục (tinh hoàn, tỳi tinh, tuyến Cowper, đầu dương vật, tuyến tiền liệt, cơ nõng hậu mụn – hành hang).
+ Mật độ tinh trựng và tỷ lệ tinh trựng sống.
+ Mức độ di động của tinh trựng (tỉ lệ tinh trựng cú tiến tới, tỉ lệ tinh trựng tiến tới nhanh, tỉ lệ tinh trựng khụng tiến tới, tỉ lệ tinh trựng khụng di động).
+ Làm tiờu bản hỡnh thỏi mụ học của tinh hoàn với kĩ thuật nhuộm Hematoxyline-Eosin (HE); đỏnh giỏ hỡnh thỏi mụ học của tinh hoàn, đo kớch thước ống sinh tinh.
+ Làm tiờu bản hỡnh thỏi của tinh trựng với kĩ thuật nhuộm papanicolaou; đỏnh giỏ hỡnh thỏi tinh trựng.
+ Lấy mỏu, li tõm tỏch huyết thanh để làm xột nghiệm định lượng nồng độ testosteron mỏu.
- Với chuột cỏi:ngày thứ 14 đến 17 sau khi thụ thai, giết chuột để đỏnh giỏ cỏc chỉ số:
+ Tỉ lệ chuột cỏi cú chửa (%).
+ Số hoàng thể trung bỡnh/1 chuột mẹ. + Số thai đậu trung bỡnh/1 chuột mẹ.
+ Số thai phỏt triển bỡnh thường/1 chuột mẹ. + Tỉ lệ thai chết sớm (%).
+ Tỉ lệ thai chết muộn (%).
+ Tỉ lệ mất trứng (số mất trứng bằng số hoàng thể trừ số thai đậu) (%). Cỏc chỉ số nghiờn cứu được so sỏnh giữa cỏc lụ với nhau.