Chương 2 : ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.4. Phương phỏp nghiờn cứu
2.4.1. Xỏc định độc tớnh cấp, độc tớnh bỏn trường diễn của OS35 trờn
vật thực nghiệm
2.4.1.1. Xỏc định độc tớnh cấp của OS35 theo đường uống trờn chuột nhắt trắng
Theo phương phỏp Litchfield – Wilcoxon [103],[104].
Chuột nhắt trắng, cả 2 giống trọng lượng 20 ± 2g được chia thành từng lụ, mỗi lụ 10 con. Cho từng lụ chuột uống thuốc thử OS35 với liều từ liều cao nhất khụng gõy chết tới liều thấp nhất gõy chết 100% chuột với thể tớch uống là 0,2 ml/10 g thể trọng chuột. Chuột được nhịn ăn 12 giờ trước khi uống thuốc, vẫn uống nước đầy đủ. Theo dừi số chuột chết trong 72 giờ đầu và tỡnh trạng chung của chuột trong 7 ngày sau khi uống thuốc (ăn uống, hoạt động, đi lại, bài tiết...). Nếu chuột chết, mổ chuột để đỏnh giỏ đại thể cỏc tổn thương của cỏc cơ quan.
Xỏc định liều chết 50% (LD50) theo tỷ lệ chuột chết trong vũng 72 giờ đầu.
2.4.1.2. Xỏc định độc tớnh bỏn trường diễn của OS35 theo đường uống trờn chuột cống trắng
Nghiờn cứu độc tớnh bỏn trường diễn trờn chuột cống trắng theo đường
uống theo hướng dẫn của WHO [105].
- Lụ chứng: uống dung mụi pha thuốc 10 ml/kg thể trọng/ngày
- Lụ trị 1: uống chế phẩm OS35 liều 150 mg/kg thể trọng/ngày với thể tớch 10 ml/kg thể trọng/ngày.
- Lụ trị 2: uống chế phẩm OS35 liều 450 mg/kg thể trọng/ngày (gấp 3 lần lụ trị 1) với thể tớch 10 ml/kg thể trọng/ngày.
Chuột cống trắng được uống dung mụi hoặc thuốc thử trong 4 tuần liền, mỗi ngày một lần vào buổi sỏng.
Cỏc chỉ tiờu theo dừi vào cỏc thời điểm trước khi uống thuốc (N0), sau khi uống thuốc 2 tuần (N14) và 4 tuần (N28), bao gồm:
- Tỡnh trạng chung, thể trọng của chuột.
- Cỏc chỉ số đỏnh giỏ chức phận tạo mỏu: số lượng hồng cầu, thể tớch trung bỡnh hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, hematocrit, số lượng bạch cầu, cụng thức bạch cầu và số lượng tiểu cầu.
- Đỏnh giỏ chức năng gan thụng qua định lượng một số chất chuyển hoỏ trong mỏu: albumin và cholesterol toàn phần.
- Đỏnh giỏ mức độ hủy hoại tế bào gan thụng qua định lượng hoạt độ enzym trong mỏu: ALT, AST.
- Đỏnh giỏ chức năng lọc cầu thận thụng qua định lượng nồng độ creatinin trong mỏu.
- Mụ bệnh học: Sau 4 tuần uống thuốc, chuột được mổ để quan sỏt đại thể toàn bộ cỏc cơ quan. Kiểm tra ngẫu nhiờn cấu trỳc vi thể gan, thận của 30% số chuột ở mỗi lụ.