Phương phỏp nghiờn cứu ảnh hưởng của dịch chiết thực vật và chế phẩm

M Ở ðẦ U

2.4.5 Phương phỏp nghiờn cứu ảnh hưởng của dịch chiết thực vật và chế phẩm

phẩm Trichoderma ủến hiệu quả phũng trừ bệnh

2.4.5.1 Phương phỏp nghiờn cứu trong phũng thớ nghiệm.

* Phương phỏp nấu mụi trường PDA ẳ cấy nấm A.niger và Sclerotium

rolfsii

Thành phần:

+ Khoai tõy: 50g + Agar: 20g

+ Glucose: 5g + Nước cất: 1000ml

Cỏch nấu: 50g khoai ủó gọt vỏ, rửa sạch, thỏi nhỏ, ủun sụi với 1l nước

cất, lọc lấy nước trong sau ủú thờm vào 20g agar, 5g glucose và nước vào cho

ủủ 1 lớt, hũa tan rồi ủưa lờn bếp ủun lại, vừa ủun vừa khuấy ủều ủể cho agar

khụng bị vún ủến sụi lăn tăn sau ủú cho hấp vụ trựng trong 30 phỳt và ủổ vào

ủĩa petrị

* Phương phỏp xử lý hạt giống: Tiến hành thớ nghiệm với giống lạc

L14, ngõm hạt với dịch chiết tỏi, hành, sả 5%, 10%, 15% và chế phẩm

cheatomium với nồng ủộ 0,05%, 0,1%trong cỏc khoảng thời gian 5 phỳt, 10

phỳt, 15 phỳt, sau ủú ủặt hạt theo phương phỏp giấy thấm. Sau ủú so sỏnh

với cụng thức ủối chứng khụng xử lý cỏc dịch chiết và chế phẩm núi trờn.

- Cỏc chỉ tiờu theo dừi bao gồm:

+ Tỷ lệ hạt bị nhiễm nấm Ạ niger và Sclerotium rolfsii trong cỏc cụng

thức thớ nghiệm và cụng thức ủối chứng khụng xử lý dịch chiết thực vật hay

chế phẩm sinh học

+ Ảnh hưởng của cỏc dịch chiết thực vật và chế phẩm sinh học trờn

ủến sức sống của mầm

+ Xỏc ủịnh tỷ lệ mầm bỡnh thường và mầm bất bỡnh thường ở cỏc

cụng thức. Cụng thức nào cho tỷ lệ mầm bỡnh thường cao nhất sẽ tiếp tục

ủưa vào thớ nghiệm nhà lướị

2.4.5.2 Phương phỏp nghiờn cứu trong nhà lưới

- Tiến hành thớ nghiệm trong chậu vạị Mỗi chậu (ủường kớnh 20 cm)

gieo 5 cõy với lạc trờn ủất phự sa ủó khử trựng.

- Thiết kế thớ nghiệm theo kiểu khối ngẫu nhiờn ủầy ủủ, mỗi cụng thức

3 lần nhắc lại mỗi lần nhắc lại 50 cõy và cú ủối chứng.

2.4.5.2.1 Thớ nghiệm xử lý dịch chiết thực vật.

a, Lõy nhiễn nấm Ạ niger xử lý dịch chiết thụ.

• Lõy nhiễm nấm Ạ niger vào hạt giống, ủất.

* Thớ nghiệm 1: Thử nghiệm ở nồng ủộ 5%

CT1 (CTðC): Lõy nhiễm nấm Ạ niger

CT2: Lõy nhiễm nấm Ạ niger và xử lý dịch chiết tỏi 5%

CT3: Lõy nhiễm nấm Ạ niger và xử lý dịch chiết sả 5%

CT4: Lõy nhiễm nấm Ạ niger và chế phẩm sinh học Trichoderma.

* Thớ nghiệm 2: Thử nghiệm ở nồng ủộ 10%

CT1 (CTðC): Lõy nhiễm nấm Ạ niger

CT2: Lõy nhiễm nấm Ạ niger và xử lý dịch chiết tỏi 10%

CT3: Lõy nhiễm nấm Ạ niger và xử lý dịch chiết sả 10%

* Thớ nghiệm 3: Thử nghiệm ở nồng ủộ 15%

CT1 (CTðC): Lõy nhiễm nấm Ạ niger

CT2: Lõy nhiễm nấm Ạ niger và xử lý dịch chiết tỏi 10%

CT3: Lõy nhiễm nấm Ạ niger và xử lý dịch chiết sả 10%

* Thực hiện tương tự cỏc thớ nghiệm trờn với dịch chiết với cồn.

• Lõy nhiễm nấm Ạ niger với phương phỏp lõy nhiễm khi cõy ủược 2 lỏ

mầm.

- Cỏc thớ nghiệm ủược bố trớ tương tự như trờn: Dung dịch bào tử nấm

Ạ niger với số bào tử 23. 10⁹ cfụ Phun vào ủất và cõy con khi cõy ủược 2 lỏ

mầm.

b. Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsiị

• Thử nghiệm dịch chiết thụ cựng chế phẩm sinh học.

* Thớ nghiệm 1: Thử nghiệm ở nồng ủộ 5%

CT1 (CTðC): Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii

CT2: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và xử lý dịch chiết tỏi 5%

CT3: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và xử lý dịch chiết sả 5%

CT4: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và chế phẩm sinh học

Trichoderma spp.

* Thớ nghiệm 2: Thử nghiệm ở nồng ủộ 10%

CT1 (CTðC): Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii

CT2: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và xử lý dịch chiết tỏi 10%

CT3: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và xử lý dịch chiết sả 10%

CT4: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và chế phẩm sinh học

Trichoderma spp.

* Thớ nghiệm 3: Thử nghiệm ở nồng ủộ 15%

CT1 (CTðC): Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii

CT2: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và xử lý dịch chiết tỏi 5%

CT3: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và xử lý dịch chiết sả 5%

CT4: Lõy nhiễm nấm Sclerotium rolfsii và chế phẩm sinh học

Trichoderma spp.

• Tiến hành thớ nghiệm tương tự với dịch chiết tinh ( dịch chiết cồn)

Cỏch tiến hành thớ nghiệm

- Ủ hạt: Ngõm hạt giống với nước ấm (2 sụi + 3 lạnh) trong 12 h, ủể rỏo

nước và ủ vào vải ẩm.

- Nấm bệnh hũa vào nước và tưới vào ủất (mật ủộ bào tử nấm 22.106

bào tử/ 100g ủất)

- Ngõm hạt lạc vào dịch chiết ủó pha với thời gian hợp lý ủó làm ở thớ

nghiệm trong phũng trước khi gieọ Và phun dịch chiết lần 2 sau khi gieo 10

ngàỵ

- Theo dừi cỏc chỉ tiờu: tỷ lệ bệnh (%), và hiệu quả phũng trừ. ðỏnh giỏ

nồng ủộ xử lý thớch hợp nhất ủểủưa vào thớ nghiệm ủồng ruộng.

2.4.5.3 Phương phỏp nghiờn cứu ngoài ủồng ruộng.

Ruộng thớ nghiệm cú diện tớch 360 m2

Thiết kế thớ nghiệm theo kiểu khối ngẫu nhiờn ủầy ủủ, mỗi cụng thức

nhắc lại 3 lần và cú ủối chứng.

- Cụng thức 1: xử lý hạt giống bằng dịch chiết tỏi 5%, Phun lạc bẳng

dịch chiết tỏi 10% khi cõy 2 lỏ mầm, 5 lỏ thật, ra hoa, tạo củ.

Cụng thức 2: Phun chế phẩm Trichoderma

Cụng thức 3: Phun nước ló

- Cụng thức 5: Khụng xử lý dịch chiết thực vật, theo tập quỏn canh tỏc

của ủịa phương.

Tiến hành xử lý cỏc dịch chiết thực vật vào 3 thời ủiểm:

- Xử lý lần 1: xử lý hạt giống

- Xử lý lần 2: Khi cõy cú 2 lỏ mầm bằng cỏch phun ướt ủều trờn mặt lỏ

và xung quanh gốc bằng bỡnh bơm tay loại 10 lit.

- Xử lý lấn 3: Khi cõy 5 lỏ thật bằng cỏch phun ướt ủều mặt lỏ và xung

quanh gốc bằng bỡnh bơm tay loại 10 lit.

Chếủộ bún phõn và chăm súc như nhau ở tất cả cỏc cụng thức.

Cụng thức canh tỏc của ủịa phương nhổ bỏ cõy bị bệnh khi xuất hiện

tỷ lệ bệnh thấp ủồng thời phun thuốc phũng trừ bệnh.

- Xỏc ủịnh ảnh hưởng của cỏc dịch chiết thực vật ủến mức ủộ phỏt

sinh, phỏt triển của bệnh hộo rũ gốc mốc ủen và hộo rũ gốc mốc trắng trờn 3

dịch chiết thực vật khỏc nhaụ Thời gian ủiều tra từ thời kỳ cõy con ủến thời

kỳ cõy ra hoa rộ. ðiều tra 5 ủiểm ngẫu nhiờn trờn 2 ủường chộo, mỗi ủiểm

50 cõy, ủiều tra ủịnh kỳ 7 ngày một lần.

- Chỉ tiờu theo dừi: Tỷ lệ bệnh (%), và hiệu quả phũng trừ bệnh.