III. Nội dung nghiên cƣ́u
3.3.1. Kết quả chuyển cấu trúc vector pBI::rd29A::DREB3 vào giống thuốc lá
Nhằm mục đích kiểm tra hoạt động vector chuyển gen pBI::rd29A::DREB3, chúng tôi tiến hành chuyển vào cây mô hình thuốc lá giống K326 và thƣ̉ kiểm tra hoạt động.
Ở các đợt biến nạp đều thấy sau khoảng 3 tuần thì tƣ̀ các mảnh lá biến nạp đa số đều mọc lên các cụm chồi ở các mép mảnh lá . Trong khi đó , mẫu đối chƣ́ng âm không chuyển gen, khi đặt vào môi trƣờng có chƣ́a kháng sinh chọn lọc, đều bị chết dần đi và hầu hết không thấy hiện tƣợng mọc chồi ; một vài mảnh lá có xuất hiện vài chồi mầm nhú lên, nhƣng sau đó đều không phát triển đƣợc mà rụng đi . Kết quả tạo đa chồi cho thấy các đợt biến nạp đ ều có tỉ lệ tạo đa chồi cao 83%. Tuy nhiên, cũng có một số mảnh lá không mọc chồi chiếm 17%. Tƣ̀ các cụm chồi chúng tôi chọn 135 cây cho vào môi trƣờng ra rễ chọn lọc trong kháng sinh, trong số các cây này có một số cây khôn g ra rễ. Kết quả chúng tôi thu đƣợc 129 cây cho ra môi trƣờng trấu:cát.
Bảng 3.2. Tỷ lệ sống sót của các mảnh thuốc lá biến nạp qua các giai đoạn chọn lọc
STT Số mẫu biến nạp Số mẫu tạo chồi Số cây ra rễ
Số cây cho ra trấu cát
1 50 48 60 58
2 50 35 75 71
50
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Khuẩn nuôi để biến nạp Dịch huyền phù khuẩn Môi trƣờng đồng nuôi cấy
Mẫu biến nạp sau 3 tuần
Mẫu biến nạp sau 5 tuần
Ra rễ trong môi trƣờng RM Sau 2 tuần ra rễ Ra trấu:cát
Chồi không đƣợc chuyển gen
Chuyển gen ĐC không chuyển gen
51
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.15. Các giai đoạn phát triển của mảnh thuốc lá biến nạp