CHƢƠNG II LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU
2.6. Điện di gel agarose
2.6.1 Nguyên tắc của kỹ thuật điện di
Dựa vào đặc tính cấu trúc của các acid nucleic. Các đại phân tử tích điện âm đồng đều trên khắp bề mặt nên dƣới sự tác động của một điện trƣờng sẽ di chuyển về cực dƣơng của điện trƣờng (Hồ Huỳnh Thùy Dƣơng, 2002).
Sau phản ứng PCR, các DNA của vi khuẩn đƣợc nhuộm với Ethidium bromide (EtBr). Chất này có khả năng gắn xen vào giữa các base của acid nucleic và dƣới tác dụng của tia tử ngoại sẽ phát huỳnh quang. Tiến hành điện di sản phẩm trên gel agarose và quan sát kết quả dƣới tia UV có bƣớc sóng 260nm.
Thang DNA (DNA ladder): “yếu tố đánh dấu trọng lƣợng phân tử” dùng để ƣớc lƣợng kích thƣớc các trình tự acid nuleic trong gel agarose, đó là một tập hợp nhiều trình tự DNA có kích thƣớc đã biết ( Hồ Huỳnh Thùy Dƣơng, 2002).
2.6.2. Các kỹ thuật điện di chủ yếu a. Điện di trên gel agarose a. Điện di trên gel agarose
Là kỹ thuật điện di để kiểm tra DNA sử dụng agarose từ 0,3 - 2,0% làm bản gel, tùy theo kích thƣớc của DNA. Nếu kích thƣớc đoạn DNA nhỏ dƣới 1kb, hàm lƣợng agarose sử dụng khoảng 1 - 2%, trong các phòng thí nghiệm thƣờng sử dụng hàm lƣợng agarose khoảng 0,7 - 0,8%.
b. Điện di trên gel polyacrylamide
Là kỹ thuật điện di để kiểm tra DNA hoặc protein, sử dụng bản polyacrylamide với nồng độ khoảng 3,5 - 20% làm bản gel, tùy theo kích thƣớc đoạn DNA hoặc trọng lƣợng phân tử protein. Đoạn gel có kích thƣớc càng nhỏ, protein có khối lƣợng phân tử nhỏ thì hàm lƣợng polyacrylamide sử dụng càng lớn, và ngƣợc lại.
c. Điện di trên giấy
Là kỹ thuật điện di sử dụng giấy thấm Whatman 3 MM làm cầu nối giữa 2 điện cực của buồng điện di, các đại phân tử tích điện dịch chuyển trên giấy với tốc độ khác nhau tùy theo kích thƣớc và trọng lƣợng phân tử.
d. Điện di trên gel tinh bột
Tinh bột biến tính đƣợc sử dụng làm bản gel dùng trong điện di trong các nghiên cứu protein, enzyme và izoenzyme...