Nguyên lý tách chiết

Một phần của tài liệu Đánh giá giá trị sử dụng của 2 bộ kit xét nghiệm chẩn đoán SARS cov 2 được sử dụng phổ biến ở việt nam (Trang 38 - 39)

Khác với việc tách chiết RNA tổng bằng dung môi hữu cơ như trong kit Việt Á,

RNA bằng phương pháp cột silica là một dạng tách chiết pha rắn để tinh sạch RNA một cách nhanh chóng. Trong điều kiện các môi trường đệm khác nhau, RNA sẽ liên kết với màng silica và được giữ lại, cịn các thành phần khơng mong muốn khác được loại bỏ bằng cách ly tâm.

Quy trình tách chiết RNA bắt đầu với quá trình ly giải tế bào. Một chất đệm bao gồm Guanidine Thiocyanate hoặc các dạng chaotropes khác là được sử dụng để làm giảm các điện tích trên RNA và nước để polyme có thể được tinh chế bằng kỹ thuật pha rắn. Chaotropes tạo ra mạch thẳng polyme RNA, phá vỡ liên kết hydro và phá hủy hoạt động của bất kỳ RNA nào có trong dịch phân ly tế bào. Do khả năng phá vỡ liên kết hydro, chúng cũng làm ly giải tế bào bằng cách phá hủy lớp kép phospholipid. Ethanol sau đó được thêm vào để: giảm lượng nước tổng thể trong mẫu và kết tủa protein. Như đã biết, RNA rất dễ hịa tan trong nước. Sau đó, một cột spin (hỗ trợ pha rắn) sau đó được sử dụng để liên kết RNA từ dịch phân ly của tế bào. Ban đầu, dung dịch đệm rửa có nồng độ chaotrope thấp được sử dụng để làm sạch mẫu RNA và loại bỏ các protein trong khi RNA vẫn gắn vào cột. Tiếp theo, rửa cột bằng etanol sẽ loại bỏ một số muối chaotropic còn sót lại từ các lần rửa trước. Cuối cùng, dung dịch khơng có muối chaotropic, nước khơng có RNAse có thể được sử dụng để rửa giải mẫu RNA từ cột

Một phần của tài liệu Đánh giá giá trị sử dụng của 2 bộ kit xét nghiệm chẩn đoán SARS cov 2 được sử dụng phổ biến ở việt nam (Trang 38 - 39)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(93 trang)