Nghiờn cứu đặc điểm sinh vật học của ruồi đục quả Phương Đụng B. dorsalis theo phương phỏp của Walker et al. (1996) [84]. Ruồi đục quả Phương Đụng dựng cho nghiờn cứu đặc điểm sinh vật học là thế hệ thứ tỏm của quần thể loài ruồi này thu từ quả đào mốo bị hại ở Mộc Chõu năm 2009.
Thức ăn nuụi sõu non được chế biến tại phũng thớ nghiệm. Trong 100 gram thức ăn gồm cú 86 gram thịt quả cõy, 10 gram torula yeast, 3 gram đường và 1 gram nipagin.
Quả cõy được xay nhỏ và dựng mỏy quấy trộn với cỏc thành phần nờu trờn sao cho thật nhuyễn, để trong ngăn đỏ tủ lạnh sau 24 giờ lấy ra cho ró đụng. Khi thức ăn ró đụng hoàn toàn mới đem sử dụng cho thớ nghiệm nuụi sõu non của ruồi đục quả.
Thức ăn nuụi trưởng thành như ở mục 2.5.1.2.
2.5.2.1. Phương phỏp nghiờn cứu tập tớnh sinh sống
Quan sỏt hoạt động sống của cỏc pha phỏt triển của loài trong điều kiện phũng thớ nghiệm, ngoài đồng và nhà lướị Mỗi pha phỏt triển của loài được quan sỏt tối thiểu 30 cỏ thể.
Trong phũng thớ nghiệm: Hàng ngày quan sỏt theo dừi 2 lần vào giờ cố định là 9 giờ sỏng và 16 giờ, ghi lại cỏc biểu hiện về tập tớnh đó quan sỏt được. Quan sỏt bằng mắt thường đối với pha trưởng thành và pha nhộng. Sử dụng kớnh lỳp soi nổi để quan sỏt cỏc pha trứng và sõu non.
Ngoài đồng: Tập trung quan sỏt hoạt động sống của pha trưởng thành vào thời kỳ cú nhiều trưởng thành xuất hiện vào bẫy dẫn dụ. Ghi chộp cỏc biểu hiện về tập tớnh đó quan sỏt được.
Tiến hành nghiờn cứu tập tớnh gõy hại của ruồi đục quả Phương Đụng
B. dorsalis đối với một số loại quả ký chủ. Thu ngẫu nhiờn 30 quả chớn của mỗi loại quả ký chủ phổ biến ở vựng nghiờn cứụ Quan sỏt kớch thước cỏc loại
quả đó thụ Đặt mỗi quả vào một hộp nhựa trong để thu trưởng thành ruồi đục quả từ cỏc quả ký chủ nàỵ Theo dừi số lượng trưởng thành ruồi đục quả hoàn thành phỏt triển từ một quả của cỏc loại quả bị ruồi gõy hạị
2.5.2.2. Phương phỏp theo dừi thời gian phỏt triển cỏc pha, vũng đời Pha trứng
Rải từng trứng lờn đĩa thức ăn cú thành phần thịt quả đào mốo, khối lượng thức ăn là 0,3 gram/đĩạ Đặt đĩa trứng vào buồng sinh thỏi nuụi ở nhiệt độ 28°C, ẩm độ 75%, tắt ỏnh sỏng. Sử dụng kớnh lỳp soi nổi kiểm tra vỏ trứng sút lại trờn thức ăn từ sau khi thu trứng được 20 giờ, thực hiện 2 lần/ngày vào lỳc 8 giờ sỏng và 18 giờ chiều hàng ngàỵ Theo dừi 30 trứng/lần nhắc lại, thực hiện nhắc lại 3 lần.
Ghi nhận thời gian cú quả trứng nở đầu tiờn đến quả trứng cuối cựng nở. Tỷ lệ trứng nở được tớnh theo cụng thức:
Tỷ lệ trứng nở (%) = (Σ vỏ trứng/Σ trứng theo dừi ) x 100
Pha sõu non
Dựng bỳt lụng gạt sõu non vừa nở lờn đĩa thức ăn cú thành phần thịt quả đào mốo, lượng thức ăn 0,3 gram/đĩạ Đặt đĩa cú sõu non vào buồng sinh thỏi nuụi ở nhiệt độ 28°C, ẩm độ 75%, tắt ỏnh sỏng. Khi sõu non được khoảng 4 ngày tuổi bắt đầu quan sỏt việc sõu non vào nhộng vào 13 giờ hàng ngàỵ Theo dừi 30 sõu non/lần nhắc lại, thực hiện nhắc lại 3 lần.
Ghi nhận thời gian cú nhộng đầu tiờn xuất hiện và thời gian nhộng cuối cựng xuất hiện. Tỷ lệ sõu non vào nhộng tớnh theo cụng thức:
Tỷ lệ sõu non vào nhộng (%) = (Σ nhộng/Σ sõu non theo dừi) x 100
Pha nhộng
Dựng panh gắp nhộng đặt vào hộp cú sẵn mựn cưa ẩm, sau đú dựng mựn cưa ẩm phủ kớn nhộng một lớp dày 1,5 cm. Đặt hộp cú nhộng vào buồng sinh thỏi nuụi ở nhiệt độ 28°C, ẩm độ 75%, tắt ỏnh sỏng. Khi nhộng
được khoảng 7 ngày tuổi bắt đầu quan sỏt nhộng vũ hoỏ trưởng thành. Kiểm tra mỗi ngày 1 lần vào 10 giờ sỏng. Theo dừi 30 nhộng/lần nhắc lại, thực hiện nhắc lại 3 lần.
Ghi nhận thời gian cú nhộng đầu tiờn vũ húa trưởng thành đến nhộng cuối cựng vũ húa trưởng thành. Tỷ lệ nhộng vũ hoỏ tớnh theo cụng thức:
Tỷ lệ nhộng vũ hoỏ (%) = (Σ trưởng thành vũ hoỏ/Σ nhộng theo dừi ) x 100
Pha trưởng thành
Tỏch và ghộp cặp trưởng thành ngay sau khi vũ hoỏ vào lồng nuụi cỏ thể. Bụi đường nhóo lờn vải màn phớa đỉnh lồng trong 3 ngày đầu, từ ngày tuổi thứ 4 trở đi thay đường nhóo bằng hỗn hợp thức ăn dựng cho trưởng thành. Nước được cung cấp bằng xốp mỳt nối trờn đỉnh lồng tới hộp nước. Đặt lồng nuụi vào buồng sinh thỏi ở nhiệt độ 28°C, ẩm độ 75%, chiếu sỏng 12 tiếng/ngàỵ Khi trưởng thành ngoài 11 ngày tuổi bắt đầu quan sỏt trưởng thành đẻ trứng bằng cỏch dựng miếng aga nấu chớn cắt mỏng để lờn đỉnh lồng. Kiểm tra mỗi ngày 1 lần vào 16 giờ chiềụ Quan sỏt 19 cỏ thể cho mỗi lần nhắc lại, thực hiện 3 lần nhắc lạị
Ghi nhận thời gian đẻ quả trứng đầu tiờn của mỗi cặp trưởng thành. Sau đú chuyển cỏc cặp trưởng thành đó đẻ từ buồng sinh thỏi vào phũng nuụi, dựng mỏy giữ ẩm để duy trỡ ẩm độ 60-75%, nhiệt độ 26± 2oC, tiếp tục theo dừi thời gian sống và đẻ trứng của trưởng thành.
2.5.2.3. Phương phỏp nghiờn cứu cỏc chỉ tiờu về sinh sản
Nghiờn cứu hỡnh thỏi buồng trứng và tỳi tinh của trưởng thành
Quan sỏt hỡnh thỏi ống đẻ trứng của trưởng thành chưa đẻ trứng và đó đẻ trứng. Mổ trưởng thành ở cỏc giai đoạn vừa vũ hoỏ, đó vũ hoỏ nhưng chưa thành thục, vũ hoỏ đó thành thục về sinh dục. Chụp ảnh, ghi chộp cỏc đặc điểm của buồng trứng và tỳi tinh trựng đó quan sỏt được. Mổ tổi thiểu 10 trưởng thành cho mỗi quan sỏt.
Nghiờn cứu tỷ lệ giới tớnh ở pha trưởng thành
Theo dừi 100 nhộng mỗi đợt thớ nghiệm, thực hiện 6 đợt thớ nghiệm. Chọn những nhộng với khối lượng nhộng từ 13,6 mg đến 14,8 mg. Những đoạn nhộng này đặt trong buồng sinh thỏi ở mức nhiệt độ 28°C, ẩm độ 75%, tắt ỏnh sỏng. Sau khi trưởng thành vũ hoỏ được 2 ngày tuổi chuyển vào lồng nuụi ở điều kiện phũng thớ nghiệm (ẩm độ 60-75%, nhiệt độ 26± 2oC) với thức ăn nuụi trưởng thành như trỡnh bày ở trờn. Sau 10 ngày tuổi tiến hành đếm số trưởng thành đực và cỏị
Phương phỏp nghiờn cứu tỷ lệ trưởng thành cỏi đẻ trứng
Tiến hành 3 đợt thớ nghiệm ở nhiệt độ 26 ± 2oC và ẩm độ 60 - 75%. Mỗi đợt 60 cặp trưởng thành (1 cỏi, 1 đực) cú cựng độ tuổị Tỏch và ghộp cặp ngay sau khi trưởng thành vừa vũ hoỏ, nuụi bằng đường nhóo và nước trong 3 ngày đầu, từ ngày thứ tư trở đi nuụi bằng thức ăn cho trưởng thành. Lồng thả cỏc cặp trưởng thành hỡnh trụ cú đường kớnh 8 cm, bằng nhựa trong suốt. Theo dừi hàng ngày việc đẻ trứng từ ngày tuổi thứ 9 trở đi bằng cỏch để miếng aga lờn đỉnh lồng. Cứ 3 tiếng quan sỏt một lần. Ghi nhận số trưởng thành cỏi tham gia đẻ trứng. Tớnh tỷ lệ trưởng thành cỏi đẻ trứng theo cụng thức sau:
Số con đẻ trứng
Tỷ lệ trưởng thành cỏi đẻ trứng (%) = x 100 Tổng số cỏ thể thớ nghiệm
Phương phỏp thớ nghiệm theo dừi thời gian đẻ trứng trong ngày
Thả 50 cặp trưởng thành (1 cỏi, 1 đực) ở 15 ngày tuổi vào lồng nuụi (kớch thước 53 x 53 x 53 cm) ở phũng cú nhiệt độ là 26 - 28oC và 60 - 80% ẩm độ. Thu trứng bằng miếng aga (cỏc cạnh dài 3 cm, dày 3 mm) ở ba khoảng thời gian khỏc nhau trong ngày:
Cụng thức 1: thu trứng từ 9 - 12 giờ; Cụng thức 2: thu trứng từ 13 - 16 giờ; Cụng thức 3: thu trứng từ 16 - 19 giờ.
Đếm số trứng thu được ở mỗi cụng thức. Mỗi cụng thức nhắc lại 3 lần.
Nghiờn cứu sức đẻ trứng của trưởng thành cỏi
Thớ nghiệm thực hiện từ thỏng 7/2012 đến thỏng 1/2013 ở điều kiện nhiệt độ là 26 - 28oC và 60-80% ẩm độ. Thu cỏc nhộng cú khối lượng tương đương nhau từ cỏc cặp bố mẹ là thế hệ thứ 8 ở cựng điều kiện nuụị Tỏch và ghộp cặp ngay cỏc trưởng thành vừa vũ hoỏ và thả vào lồng nhựa trong suốt (cú ỉ 8 cm, cao 30 cm). Mỗi lồng là một cặp trưởng thành (1 cỏi, 1 đực).
Thu trứng bằng miếng aga (hỡnh vuụng cú cạnh dài 3 cm, dày 3 mm): vào 8 giờ hàng ngày đặt miếng aga lờn đỉnh lồng nuụi trưởng thành và đếm số trứng do mỗi cặp trường thành đẻ vào 15 giờ hàng ngàỵ Ghi chộp số trứng đẻ được hàng ngày trong suốt thời gian sống của 19 cặp trưởng thành.
Theo dừi cỏc chỉ tiờu sau :
- Thời gian đẻ trứng của trưởng thành cỏi, - Số trứng trung bỡnh đẻ được hàng ngày,
- Tổng số trứng do một trưởng thành cỏi đẻ trong suốt thời gian sống.
Nghiờn cứu lập bảng sống của ruồi đục quả Phương Đụng
Ghộp cặp trưởng thành ngay sau khi vũ hoỏ, thức ăn trưởng thành và thức ăn nuụi sõu non như trỡnh bày ở phần đầu của mục 2.5.2. Nuụi trưởng thành ở phũng nuụi cú nhiệt độ là 26oC ± 2, ẩm độ 60 - 75%. Khi trưởng thành được 15 ngày tuổi bắt đầu nghiờn cứu cỏc chỉ tiờu dựng để lập bảng sống. Cỏc chỉ tiờu gồm: tổng số trứng, số trứng nở,.v.v.. và tổng số trưởng thành cỏi được vũ hoỏ từ chớnh số trứng thu hàng ngày của mỗi cặp ruồi bố mẹ ban đầụ Nghiờn cứu được thực hiện riờng rẽ từng cặp ruồi trưởng thành và bắt đầu từ ngày đẻ trứng đầu tiờn đến ngày chết của trưởng thành cỏi thớ nghiệm. Cỏc bước thu thập và theo cỏc dừi chỉ tiờu như sau:
- Bước 1: Thu trứng bằng miếng aga (hỡnh vuụng cú cỏc cạnh dài 3 cm, dày 3 mm), đếm trứng của từng cặp trưởng thành bằng kớnh soi nổi (thao tỏc nhanh để trỏnh khụ trứng gõy ảnh hưởng đến tỷ lệ nở). Sau đú đặt cỏc trứng này vào đĩa thức ăn (0,3 gram thức ăn sõu non cho 1 trứng), đặt vào hộp nhựa và đặt vào hộp giấy carton (hỡnh vuụng, cạnh 65 cm x cao 35cm) để đảm bảo tối hoàn toàn. Ghi chộp ngày thu trứng
- Bước 2: Kiểm tra trứng nở từ khi trứng được 35 giờ tuổi, kiểm tra 2 lần mỗi ngàỵ
- Bước 3: Kiểm tra giai đoạn sõu non một lần mỗi ngày - Bước 4: Kiểm tra giai đoạn nhộng mỗi ngày 1 lần
- Bước 5: Khi cú trưởng thành vũ hoỏ ghi chộp số con cỏi thế hệ sau thu được từ một cặp bố mẹ, ghi thời điểm trưởng thành chết để xỏc định vũng đời và thời gian sống của trưởng thành.
Ký hiệu và tớnh toỏn cỏc chỉ tiờu theo cụng thức sau (dẫn theo Nguyễn Văn Đĩnh, 1994 và dẫn theo Vargas et al., 1997) [9][79]:
- x (ngày): khoảng cỏch giữa cỏc tuổi - lx: tỷ lệ con cỏi sống sút đến tuổi x - mx: sức sinh sản của con cỏi ở tuổi x
- Mx (trứng/con cỏi): số lượng trưởng thành vũ hoỏ từ trứng do con cỏi đẻ ở tuổi x
- ΣMx (trứng/con cỏi): tỷ lệ sinh lý thuyết trong suốt cuộc đời
- Σ lx Mx(trứng/con cỏi): số trứng hữu hiệu trong suốt cuộc đời 1 con cỏi - Ro(♀/thế hệ): tổng số con cỏi sinh ra sống sút ở thế hệ kế tiếp;
Ro = Σ lx Mx (1) - r (1/thời gian) : Tỷ lệ tăng tự nhiờn; 1= Σ e-rx lx Mx (2) - Thời gian của một thế hệ là tuổi trung bỡnh của tất cả cỏc cỏ thể mẹ khi đẻ ra con cỏị Chỉ số này tớnh bằng cỏc giỏ trị T và Tc. T tớnh theo cơ sở
mẹ, Tc tớnh theo cơ sở con mới sinh (dẫn theo Nguyễn Văn Đĩnh, 1994 và dẫn theo Vargas et al., 1997) [9][79]. Σ x. lx . mx Tc (ngày) = (3) R○ T (ngày) = Σ lx . mx . e 7-rt (4)
- Chỉ số giới hạn gia tăng tự nhiờn λ cho biết số lần chủng quần gia tăng trong một đơn vị thời gian (Laing, 1996; dẫn theo Nguyễn Văn Đĩnh, 1994 và dẫn theo Vargas et al., 1997) [63][9][79]. . . , tớnh theo cụng thức
λ = antiloger (5) - Thời gian tăng số lượng quần thể DT tớnh theo cụng thức (dẫn theo Nguyễn Văn Đĩnh, 1994; dẫn theo Vargas et al., 1997) [9] [79]. như sau
DT (ngày) = [ln(2)]: r (6)
Nghiờn cứu xỏc định ngưỡng nhiệt độ khởi điểm phỏt dục (t○)
Để xỏc định ngưỡng nhiệt độ khởi điểm phỏt dục đó nuụi ruồi đục quả Phương Đụng ở 2 mức nhiệt độ khỏc nhau là t1 = 23oC vàt2 = 28oC ở cựng mức ẩm độ 75% trong buồng sinh thỏị Dựa và kết quả về thời gian phỏt triển cỏc pha và thời gian hoàn thành một vũng đời của ruồi đục quả Phương Đụng để xỏc định ngưỡng nhiệt độ khởi điểm phỏt dục. Ngưỡng nhiệt độ khởi điểm phỏt dục được tớnh theo cụng thức:
n2 . t2 - n1 . t1
t○ = (7)
n2 - n1
Tổng tớch ụn hữu hiệu (K) là lượng nhiệt cụn trựng tớch luỹ để hoàn thành một vũng đời, K là hằng số (dẫn theo Phạm Bỡnh Quyền, 2006) [27] (dẫn theo Iakhontov, 1972) [53] và được tớnh theo cụng thức sau:
K= n1 (t1-t○) hoặc K = n2 (t2 - t○) (8) Số lứa lý thuyết trong một năm (Y) được tớnh theo cụng thức:
Q
Y = (9) K
Q là tổng tớch ụn cả năm cho loài ruồi đục quả Phương Đụng: Q = 31 (tn1 - t○)+ 28 (tn2 - t○)+...+ 31 (tn12 - t○) (10)
Trong đú số ngoài ngoặc đơn là số ngày của cỏc thỏng 1,2,...12; tn1, tn2,.... là nhiệt độ trung bỡnh cỏc thỏng trong năm.
Nghiờn cứu tập tớnh du nhập vườn đào của ruồi đục quả Phương Đụng
Thớ nghiệm được thực hiện vào vụ quả đào mốo cỏc năm 2011, 2012 và 2013. Sử dụng loại bẫy Macphail mầu vàng với thức ăn nhử là hydrolysed yeast protein (pha 50 gram hydrolysed yeast protein trong 50 ml nước.
Đặt 3 bẫy ở 3 vườn đào mốo khỏc nhau, nhưng cú cựng độ tuổi cõy và số lượng cũng như giai đoạn cỏc lứa quả gần tương đương nhaụ Trưởng thành cỏi trong bẫy được thu vào cỏc thời gian khỏc nhau trong ngày:
Cụng thức 1: thu trưởng thành cỏi trong bẫy vào 8 - 11 giờ, Cụng thức 2: thu trưởng thành cỏi trong bẫy vào 12-14 giờ, Cụng thức 3: thu trưởng thành cỏi trong bẫy vào 16-18 giờ.
Ngõm ngay trưởng thành cỏi vào cồn 30% sau đú mổ trong ngày để kiểm tra buồng trứng.
Chỉ tiờu điều tra: Tỷ lệ trưởng thành cỏi cú trứng thành thục ở trong cỏc cụng thức thớ nghiệm. Tỷ lệ trưởng thành cỏi cú trứng thành thục = (số trưởng thành cỏi cú trứng thành thục/tổng số trưởng thành cỏi cú ở cụng thức) x 100.