PHẦN 4 : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.4. Đề xuất một số kỹ thuật nhân giống trong phịng thí nghiệm
4.4.1. Kỹ thuật nhân giống cấ pI
a, Chuẩn bị nguyên liệu, thiết bị, dụng cụ
- Khoai tây loại mới, không b thối, hỏng, không nảy m m, - Đường glucoza - Thạch agar - Nước cất * Chuẩn b thiết b và ụng cụ - Tủ cấy, nồi hấp khử trùng, tủ ấm
- Các ống nghiệm, bình tam giác, b nh đong, phễu lọc 250 ml. - Nồi nấu môi trường
- Bếp ga
- Bông y tế, băng án, báo...
* Chuẩn b môi trường nhân giống
- Bước 1: Chiết xuất chất inh ư ng từ khoai tây
+ hoai tây gọt vỏ, cắt nhỏ k ch thước 1cm x1cm
+ Đun sôi đến khi khoai tây ch n kỹ từ 5 - 7 phút rồi lọc lấy nước - Bước 2: Trộn them đường và agar vào ung ch khoai tây
+ Thêm thạch và đường vào ung ch khoai tây rồi khuấy đ u + Bổ sung nước cho đủ 1 l t
+ Đun cho h n hợp ung ch từ 3 - 5 phút thu được môi trường giống cấp I.
- Bước 3: hử trùng môi trường cấp I
Đem khử trùng ở nồi hấp ở nhiệt độ 110o
C, 1atm trong vịng 60 phút - Bước 4: Đổ mơi trường vào ống nghiệm hoặc b nh tam giác.
Sau khi khử trùng ung ch để nguôi rồi cho vào phễu nối với ống cao su có gắn kẹp sắt. Ấn kẹp sắt cho môi trường chảy vào đáy ống nghiệm, nên đổ khoảng 1/5 so với chi u ài ống nghiệm rồi để nghiêng một góc 40 - 45 độ, đổ khoảng 250 ml vào bình tam giác.
- Bước 5: Làm nút bông cho các ống nghiệm và b nh tam giác Lấy bông nút ống nghiệm
- Bước 6: Ghi ngày, tháng rót mơi trường và cho vào tủ ấm 1 – 2 ngày. + Ghi ngày tháng rót mơi trường lên ống nghiệm và b nh tam giác.
+ Sau đó đóng ống nghiệm chứa mơi trưường thành từng bó rồi để vào tủ ấm 37o
C trong 1 đến 2 ngày, nếu ống nào b nhiễm khuẩn phải loại bỏ.
b, Kỹ thuật nhân giống cấp I
Cấy truy n giống cấp I là quá tr nh cấy giống nấm từ ống gốc sang các ống nghiệm chứa môi trường.
Trong quá tr nh cấy phải đảm bảo: + Ph ng cấy ln sạch sẽ, thống mát
+ Dụng cụ th nghiệm phải được vô trùng bằng cồn.
+ Tủ cấy phải được bật đèn t m từ 15 - 30 phút trước khi cấy. - ỹ thuật nhân giống cấp I thực hiện theo các bước sau:
+ Bước 1: hử trùng tất cả ụng cụ bằng cồn 700 và sau đó bật đèn tím trong bốt cấy trong v ng 15 - 30 phút để vệ sinh tủ cấy trước khi tiến hành cấy chuy n giống.
+ Bước 2: Trước khi cấy vệ sinh tay bằng cồn, lau các ống giống và ống môi trường bằng cồn trước khi cho vào tủ cấy.
+ Bước 3: Mở nút bông và giữ nút bông của ống giống gốc và ống môi trường bằng kẽ tay út và áp út.
+ Bước 4: hử trùng miệng ống giống và ống môi trường trên ngọn lửa đèn cồn.
+ Bước 5: Dùng que cấy lấy một mẫu giống có k ch thước 5 x 5mm từ ống giống gốc chuyển mẫu giống gốc vào ch nh giữa b mặt thạch ống môi trường.
+ Bước 6: hử trùng lại miệng ống giống gốc và ống mơi trường đã có giống. + Bước 7: Đậy nút bơng ống giống gốc và ống giống cấp I lại như ban đ u khử trùng lại đ u que cấy và tiếp tục thực hiện cấy giống gốc sang các ống môi trường tiếp theo như đã thực hiện cho đến khi hồn thành.
+ Bước 8: Sau đó ghi lại ngày giờ cấy giống và xếp các ống giống lên kệ để ni sợi.
c, Kỹ thuật chăm sóc và ni hệ sợi trong phịng thí nghiệm
- hi chăm sóc hệ sợi nấm trong ph ng th nghiệm th ph ng th nghiệm c n phải sạch sẽ, khơng bụi bẩn, rác thải, khơng có nấm mốc, ph ng khơ thống, t ánh sáng trực tiếp, có hệ thống điện để có thể đi u chỉnh nhiệt khi c n.
- Tùy thuộc vào m i loại giống nấm, nhiệt độ và thời gian nuôi sợi giống cấp I là khác nhau:
+ Đối với nấm im Châm nhiệt độ th ch hợp cho sợi nấm phát triển là từ 18 – 200C, độ ẩm từ 65 – 75%, đi u kiện ánh sáng yếu.
+ Nấm Hương nhiệt độ nuôi sợi là từ 240
C ± 2, thời gian ăn k n ống nghiệm là từ 13± 1 ngày.
+ Giống nấm M nhiệt độ nuôi sợi là từ 220C ± 2, thời gian ăn k n ống nghiệm là từ 32 ± 2 ngày.
+ Nấm Rơm nhiệt độ nuôi sợi là 290
C ± 2, thời gian ăn k n ống nghiệm là từ 7 ± 1ngày.
d, Kỹ thuật tuyển chọn giống tốt và bảo quản giống
- Giống cấp I tốt là những giống đảm bảo yêu c u sau đây:
+ Sợi nấm ăn k n b mặt môi trường một màu đồng nhất của sợi nấm. + Sợi nấm khỏe, phân nhánh mạnh trên b mặt môi trường.
+ Không nhiễm vi sinh vật lạ.
- Các ống giống cấp I đạt tiêu chuẩn v chất lượng nếu chưa ùng ngay c n đưa đi bảo quản ở nhiệt độ thấp để k m hãm tốc độ sinh trưởng và kéo ài thời gian sử ụng của giống nấm. Các ống giống chưa ùng đến thường được bảo quản trong tủ lạnh hoặc tủ mát.
- Chế độ nhiệt và thời gian bảo quản áp ụng cho các loại giống nấm cấp I đối với 4 loại nấm im Châm, Hương, M , Rơm như sau:
+ Giống nấm im Châm nhiệt độ bảo quản từ 4 – 50C, thời gian bảo quản < 3 tháng.
+ Giống nấm Hương nhiệt độ bảo quản là từ 4 – 100C, thời gian bảo quản < 3 tháng.
+ Giống nấm M nhiệt độ bảo quản là từ 4 – 80C và thời gian bảo quản < 4 - 5 tháng.
+ Giống nấm Rơm bảo quản ở nhiệt độ >150C và thời gian bảo quản < 1 tháng.