PHẦN 4 : KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
4.4. Đề xuất một số kỹ thuật nhân giống trong phịng thí nghiệm
4.4.2. Kỹ thuật nhân giống cấp II
a, Chuẩn bị nguyên liệu, thiết bị, dụng cụ
* Chuẩn b nguyên liệu
- Thóc khơng b mốc, mối, mọt - Nước
- Bột nhẹ
* Chuẩn b ụng cụ th nghiệm
- Chai thủy tinh
- Cân
- Bông y tế, ây n t…
- Nồi luộc thóc, que thủy tinh, túi nilong - Bếp ga
* Chuẩn b môi trường nhân giống cấp II - Bước 1: Xử l thóc
+ Thóc được ngâm trong nước trong khoảng từ 12 - 16 tiếng để loại bỏ hạt lép. + Cho thóc vào nồi rồi đổ nước ngập thóc, đun sơi ùng đũa đảo đ u đến khi hạt thóc nứt 1/3 vỏ thóc, gạo bên trong ch n m m là được, đổ thóc ra để ráo nước và nguội.
- Bước 2: Tiến hành phối trộn thóc với bột nhẹ
Tiến hành trộn bột nhẹ CaCO3 theo tỉ lệ 10 kg thóc trộn 200 g bột nhẹ, trộn đ u phủ đ u lớp bột trên hạt thóc luộc là được.
- Bước 3: Tiến hành đóng gói mơi trường cấp II
Cho nguyên liệu trên vào chai thuỷ tinh bằng 2/3, m i đong 500 g thóc - Bước 4: Làm nút bông
Lấy một lượng bông vừa đủ, tạo đ u tr n nút vào cổ chai, sau đó ùng túi nilơng bao k n đ u nút.
Cho các chai giống cấp II vào nồi hấp khử trùng trong 1 giờ ở áp lực 1atm nhiệt độ 121oC. Sau đó cho vào tủ ấm 1- 2 ngày trước khi cấy giống.
b, Kỹ thuật nhân giống cấp II
Chuẩn b giống cấp I có hệ sợi nấm phát triển đồng đ u, không b nhiễm nấm bệnh.
Trước khi nhân giống nếu sử ụng giống cấp I để trong tủ lạnh c n phải bỏ ra ngoài đi u kiện thường trước 1 - 2 ngày.
Các thao tác nhân giống cấp II bao gồm các bước sau:
- Bước 1: Mang gang tay, khẩu trang và khử trùng tay bằng cồn trước khi thực hiện thao tác cấy.
- Bước 2: Dùng cồn lau ống giống cấp I trước khi cho vào tủ cấy
- Bước 3: Đưa các ụng cụ th nghiệm vào trong tủ cấy và đốt đèn cồn trong vòng 2 - 3 phút
- Bước 4: hử trùng các ụng cụ th nghiệm bằng cồn
- Bước 5: Mở nút bông của ống giống cấp I và chai giống cấp II, hơ miệng ống nghiệm và miệng chai giống trên ngọn lửa đèn cồn.
- Bước 6: Dùng que cấy lấy 1/2 ph n giống trong ống giống cấp I cho vào giữa chai giống cấp II.
- Bước 7: Hơ miệng chai goings cấp II trước ngọn lửa đèn cồn rồi lấy bông nút lại.
- Bước 8: Làm tương tự với các chai giống c n lại.
- Bước 9: Dùng giấy báo bọc đ u chai lại, ghi ngày tháng thực hiện cấy giống vào trên chai.
- Bước 10: Xếp các chai giống lên giá để nơi thoáng mát - Bước 11: Vệ sinh buồng cấy.
c, Kỹ thuật chăm sóc và ni hệ sợi
Ph ng nuôi sợi phải đảm bảo sạch sẽ, thống mát, khơng ẩm mốc.
M i loại nấm có một yêu c u v nhiệt độ khác nhau để phát triển sợi nấm: + Nấm im châm là giống ch u lạnh nhiệt độ nuôi sợi là 15 - 160
C + Nấm Hương nhiệt độ nuôi sợi khoảng 24 - 260
+ Nấm M nhiệt độ nuôi sợi tốt nhất là 15 - 160C + Nấm Rơm nhiệt độ nuôi sợi là 22 - 250
C
d, Kỹ thuật tuyển chọn giống tốt và bảo quản giống
Những chai giống cấp II tốt là chai giống ăn lan nhanh, có hệ sợi nấm đồng đ u, khơng b nấm mốc, hệ sợi nấm có màu trắng đồng nhất.
- Thời gian bảo quản của các chai giống cấp 2 là:
+ Nấm M , nấm Hương, nấm im châm bảo quản ở nhiệt độ 2 - 50C, thời gian bảo quản kéo ài 30 - 45 ngày
+ Nấm Rơm nhiệt độ bảo quản là 15 - 160C thời gian bảo quản nhi u nhất là 15 ngày.