PHẦN 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả ựánh giá các tổ hợp lai vụ đơng
4.3.1. PCR xác ựịnh cá thể mang kiểu gen kháng Ty3/Ty3 từ 4 quần thể phân ly F
Theo Ji và cộng sự (2007), gen Ty3 nằm trên nhiễm sắc thể 6, ựược phát hiện và ựưa vào cà chua trồng từ các mẫu giống cà chua dại LA2779, LA1932 và LA1969 thuộc loài S. chilense. Cặp mồi P6-25 F2/R5 ựược thiết kế ựể nhân lên
vùng DNA gần gen Ty3, cách gen này khoảng 5cM. Do có sự khác nhau ở vùng
DNA ựược nhân lên trong 3 vùng ựược chuyển vị có nguồn gốc từ 3 mẫu giống cà chua dại kể trên nên sản phẩm tạo ra sẽ là một băng dài 450 bp với alen kháng Ty3 từ LA2779, một băng 630 bp với alen Ty3 từ LA1932, và một băng 660 bp với alen
Ty3 từ LA1969, alen mẫn cảm ty3 cho một vạch băng dài 320 bp. Dịng bố 192 có
nguồn gốc từ mẫu cà chua dại S.chilense LA1932, do đó sản phẩm PCR với cặp
mồi P6-25 F2/R5 sẽ cho ra một băng 630 bp ở các cá thể mang gen Ty3 ựồng hợp tử, hai băng 630 và 320 bp ở các cá thể dị hợp tử và một băng 320 bp ở các cá thể không mang gen Ty3.
Hình 4.8. Kết quả PCR xác định cá thể mang gen kháng Ty3 ựồng hợp tử trong quần thể phân ly F2 của tổ hợp T1 sử dụng cặp mồi P6-25 F2/R5
L: GeneRuler 1 kb DNA Lađer 250 to 10000 bp; 2, 3, 5, 12: các cá thể mang gen Ty3/Ty3; 1, 4, 7, 9, 11, 13: các cá thể mang gen Ty3/ty3; 6, 8,10: các cá thể mang gen ty3/ty3 4, 7, 9, 11, 13: các cá thể mang gen Ty3/ty3; 6, 8,10: các cá thể mang gen ty3/ty3
Thông qua kết quả phân tắch PCR (hình 4.8) chúng tơi đã thu được lần lượt 8, 11, 10 và 7 cá thể mang gen Ty3 ựồng hợp tử từ 40 cá thể đem phân tắch lần lượt thuộc các quần thể F2 của các tổ hợp T1, T2, T7 và T12 (bảng 4.8). Như vậy, qua phân tắch PCR trên tổng số 160 cá thể, ựã chọn ựược tổng cộng 36 cá thể mang kiểu gen Ty3/Ty3 từ 4 quần thể phân ly F2 nghiên cứu, 36 cá thể này ựược trồng ra