B t nguyên li u khô 20.0 g
Dung môi ethanol T l 1:10 (g/mL) Chi t L c Lo i dung môi Cao t ng T = 45-50 oC t = 45 phút r = 250 rpm
28
Hi u su t chi t cao t ng đ c tính theo cơng th c:
H m ơ
m ê ơ
Trong đóμ H : hi u su t chi t (%).
m ô: kh i l ng cao khô thu đ c sau quá trình chi t (g).
m ê ô: kh i l ng nguyên li u khô đem chi t (g).
2.3.4.ăPh ngăphápăs ăb th c v t
Ph ng pháp đ nh tính các h p ch t có trong cơy vƠ d u hi u nh n bi t n u k t qu d ng tính nh sauμ
Ki m tra polyphenol: 2 mL d ch chi t đ c khu y v i 2 mL n c c t và vài gi t dung d ch FeCl3 đ c thêm vào. Tùy vào s l ng, v trí nhóm OH trong phân t mà cho màu l c, xanh, nơu đ .
Ki m tra flavonoid:
Ph n ng cyanidin: thêm vào d ch chi t đ i t ng nghiên c u b t Mg r i nh t t HCl đ m đ c. yên sau 1 đ n 2 phút và quan sát hi n t ng. Hi n t ng d ng tính khi có mƠu đ cam, đ th m ho c đ t i.
Tác d ng c a chì acetate ki m: cho 1 mL d ch chi t, thêm 1 mL dung d ch chì acetate 10%. Ph n ng d ng tính t o t a vàng nh t đ n s m.
Ki m tra tanin (K t t a v i gelatin): thêm vào d ch chi t dung d ch gelatin 1% có ch a 10% NaCl. Hi n t ng d ng tính khi ph n ng t o t a.
Ki m tra carotenoid: cho vào d ch chi t đ i t ng nghiên c u 1-2 gi t H2SO4
đ m đ c. Dung dch có ánh xanh d ng n u có m t carotenoid.
Ki m tra glycoside tim (Ph n ng Keller-Kiliani): Hòa tan 5 mg ch t th vào 2 mL dung d ch 1 r i cho thêm 2 mL dung dch 2. Trong đó, dung d ch 1 g m 100 mL
acetic acid đ m đ c tr n v i 1 mL dung d ch FeCl3 5%. Dung d ch 2 g m 100 mL
sulfuric acid đ m đ c tr n v i 1 mL FeCl3 5%. L p phơn cách có mƠu đ ho c nâu
29
Ki m tra saponin (Ph n ng Liebermann-Burchard): L y 5 mL d ch chi t đun
cách th y trong ng nghi m cho nóng r i cho vào 1 mL anhydride acetic, cho thêm 1 gi t H2SO4 đ m đ c. N u lƠ d n xu t steroid thì có mƠu l - xanh lá, cịn d n xu t triterpenoid thì có mƠu h ng đ n tía.
2.3.5. nhăl ngăhƠmăl ng polyphenol theoăph ngăphápăFolinăậ Ciocalteau
HƠm l ng polyphenol c a các đ i t ng kh o sát đ c xác đ nh theo ph ng
pháp Folin – Ciocalteau c a Singleton (1999) [82].
a)ăNguyênăt c
S trao đ i đi n t trong môi tr ng ki m c a h p ch t phenolic b oxy hóa b i thu c th Folin – Ciocalteau s t o thành h p ch t có mƠu xanh (molydenium). o đ h p thu b c sóng 760 nm k t h p v i đ th đ ng chu n theo gallic acid, tính
đ c hƠm l ng t ng các h p ch t phenolic có trong m u phân tích.
b)ăPh ngăphápăti n hành
- Chu n b các dung d ch sau:
Dung d ch Na2CO3 20%: hòa tan 20 g Na2CO3 b ng n c c t, đnh m c lên th tích 100 mL r i đun sôi. Sau khi dung d ch ngu i, thêm m t vài tinh th Na2CO3, sau 24 gi l c l y dung d ch trong.
Dung d ch gallic acid 1 mg/mL: hòa tan 10 mg gallic acid trong 1 mL DMSO,
sau đó đ nh m c lên 10 mL b ng n c c t. T dung d ch trên pha ra các dung d ch có n ng đ sau b ng n c c t: 0; 100; 200; 400; 500; 600; 700; 800; 900 và 1000 (g/mL).
- L p đ ng chu n:
Cho 200 L thu c th Folin – Ciocalteau vào 40 L dung dch gallic acid các n ng đ khác nhau, đ ng nh t b ng b l c siêu âm trong 5 phút nhi t đ phòng. Thêm 600 L dung dch Na2CO3 20% và 3160 L n c c t vào h n h p trên, ti p t c
đ ng nh t b ng b l c siêu ơm trong 30 phút c ng nhi t đ phòng. Ti n hƠnh đo
m t đ quang b c sóng = 760 nm. L p l i 3 l n cho m i n ng đ , l y giá tr trung bình.
30
- o m u:
Hịa tan 10 mg cao chi t trong 1 mL DMSO 100%, sau đó pha ra các n ng đ
phù h p đ thu đ c đ h p thu n m trong kho ng tuy n tính c a đ ng chu n gallic acid. Ti n hƠnh đo m u t ng t nh b c l p đ ng chu n gallic acid. L p l i 3 l n cho m i n ng đ , l y giá tr trung bình.